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标题:【求助】等电聚焦的电压问题

DDD[使用道具]
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发表于 2013-12-25 17:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】等电聚焦的电压问题


初次接触双向电泳，等电聚焦的时候电压到4000v以后就上升很慢了，什么原因导致的呢？
提蛋白用的是丙酮提取，用伯乐公司的2-D cleapup kit 除盐。
蛋白样品溶解液配置：9M尿素，4%CHAPS, 2%IPG缓冲液， 40mMDTT,
40mMTris-base.
希望各位高手指教。
谢谢！
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remenb[使用道具]
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发表于 2013-12-25 17:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

看结果 到8000v了吗
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wood533[使用道具]
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发表于 2013-12-25 17:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你设置的电压是多少？
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tangxin_80[使用道具]
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发表于 2013-12-25 17:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那升压那步你设置的最大电压是多少啊？最后问下，你做的是什么样品啊？
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DDD[使用道具]
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发表于 2013-12-25 17:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

升压那一步设置的电压最大是8000V,等电聚焦的最大电压也是8000V，样品是尿蛋白。
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tangxin_80[使用道具]
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发表于 2013-12-25 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那不就结了
看一下你设置的总聚焦 vh 够不够60000
然后看一下电泳图 有没有聚焦不充分
不要疑问高压的上升问题 样品 叫 很多都有差异
记得是设置的限制电流的 0.3 记不得了
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DDD[使用道具]
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发表于 2013-12-25 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最后vh达到了，但是电压还是没到8000.是样品有问题吗？还是溶解液的配置有问题呢？
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jujuba[使用道具]
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发表于 2013-12-25 17:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

升压慢和盐可能有关，我之前也遇到过，你把你详细的步骤发过来看下，我看看，是不是哪步处理不好，还有你最后的胶图，看看你的点跑的怎么样，有时候电压虽然没到最大，但是聚焦时间够了，也行的
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wmp1234[使用道具]
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发表于 2013-12-25 17:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
加了Tris不容易升压
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