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是个好问题。
这个现象在离子交换实际操作中一直是存在的,包括阴离子的DEAE、Q和阳离子的CM、SP。
但没有那本书中详细的讲过这个问题,只是说要充分平衡。
不仅是平衡时的pH,而且在用盐洗脱时也常常伴随着pH的波动。
我也思考过,不能完全解释。
觉得这些pH的变换至少和缓冲液的电离平衡、凝胶配基的电离平衡、溶液的扩散作用、pH计检测时的盐离子效应、蛋白质的两性等等相关。因素较多,想不过来了。
例如:Q柱在用NaCl、NaOH溶液再生处理后,用pH7.5中性的缓冲液去平衡,其pH曲线是先缓慢下降,然后快速下降至平衡缓冲液的pH7.5以下,或许是pH6.5,然后再慢慢回升到pH7.5,完成柱的平衡过程。
在用盐洗脱蛋白质时有一个pH挖坑的过程,先下降,回升超过缓冲液pH,再缓慢回复到正常。
据我的经验,长时间的平衡液洗柱,平衡肯定是可以达到的。一般强的Q、SP柱平衡要快些,弱的DEAE、CM要慢些。对常使用的20mM浓度的平衡缓冲液,Q、SP柱一般使用8-10个柱体积左右就差不多了。