【求助】插入片段上游的信号肽对蛋白表达有什么影响？

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标题:【求助】插入片段上游的信号肽对蛋白表达有什么影响？

qqq111[使用道具]
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发表于 2013-12-26 17:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

想问一下，插入片段上游的信号肽对蛋白表达有什么影响？会引起不表达吗？这方面的知识了解较少，希望高手指点指点

glass[使用道具]
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发表于 2013-12-26 17:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果是原核表达的话，克隆基因时最好将信号肽序列去掉，然后进行克隆。如果插入片段一端有信号肽，且信号肽前无标签之类的其他序列，表达后的蛋白有可能依靠信号肽被转运至细胞周质，或胞外，信号肽在此过程中被切除，也有可能由于信号肽切割效率低，表达后做电泳跑出两条带，为含信号肽和不含信号肽的蛋白，当然是否表达还与其他因素有关，也有可能产生包涵体，具体做过才会知道。

remenb[使用道具]
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发表于 2013-12-26 17:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

想问下楼主，请问怎么鉴定一段序列有没有含信号肽啊

changlhsyo[使用道具]
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发表于 2013-12-26 17:53 资料个人空间短消息加为好友

小中大

一般来说，各种信号肽在氨基酸序列上虽然有所不同，但却有相同的特点及功能，信号肽N-末端为2-10个带正电荷的氨基酸，中间为由10-20个氨基酸组成的高度疏水区，C-末端为信号肽切割位点，由6个左右的中性氨基酸组成，常见的氨基酸为丙氨酸，甘氨酸。可以来这个网站做信号肽预测和分析
cuturl('http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/')

remenb[使用道具]
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发表于 2013-12-27 10:15 资料个人空间短消息加为好友

小中大

那如果是一段CDNA，如何转换成氨基酸序列啊因为要输入形式是氨基酸序列吧

hustwb[使用道具]
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发表于 2013-12-27 10:16 资料个人空间短消息加为好友

小中大

DNA翻译成氨基酸序列，好多生物学常用软件都能做到，网上也有好多在线工具，可以百度一下.

one[使用道具]
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发表于 2013-12-27 10:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 glass 于 2013-12-26 17:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

如果是原核表达的话，克隆基因时最好将信号肽序列去掉，然后进行克隆。如果插入片段一端有信号肽，且信号肽前无标签之类的其他序列，表达后的蛋白有可能依靠信号肽被转运至细胞周质，或胞外，信号肽在此过程中被切除，也有可能由 ...

你好，前一段时间很傻的把信号肽给构建到一个载体上，该载体多克隆位点之前有His标签，本来想这样到时表达的蛋白既能分泌出来又可用亲和纯化，但理论上标签会随信号肽的切除而切除，痛心....这样构建的载体还有没有用？有没有信号肽没被切除又能分泌到胞外的情况？

glass[使用道具]
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发表于 2013-12-27 10:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这样的载体估计不能用了，周质表达的好处是可以通过渗透压法裂解细胞，释放周质蛋白，杂蛋白的量少，利于纯化，但是周质表达的蛋白量要比胞内表达的量低，只要胞内表达的蛋白不是包涵体，胞内表达就行了。信号肽没被切除又能分泌到胞外的情况也有，但是这是一种不正常的现象。而且有信号肽的重组蛋白也不能用吧，毕竟天然蛋白是没有信号肽的。

qqq111[使用道具]
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发表于 2013-12-27 10:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

在别的地方看见说信号肽的加入可以使蛋白表达于胞外，比如（pet）系列的载体，如果出现加了信号肽反而不表达会是什么原因？有相同遭遇的战友没有？

qqq111[使用道具]
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发表于 2013-12-27 10:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位有没有遇到过前面加了信号肽之后质粒不表达的情况，有大侠能给出点自己的解释吗？最近遇到这种情况不知道是不是信号肽的原因！