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标题:【求助】western中电泳速度超慢

tewank[使用道具]
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发表于 2014-1-7 11:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】western中电泳速度超慢


各位大人，小弟我是菜鸟，最近刚开始做western，发现别人跑胶一般都是两个小时结束战斗，但是我的胶要跑六到八个小时，郁闷死我了。我用的是恒压80v跑，Bio-RAD的电泳仪，请问是什么原因呢？？？？电泳的时候具体的参数应该怎么调？
谢谢谢谢
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yjf1026[使用道具]
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发表于 2014-1-7 11:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你跟别人用的buffer都一样吗？Bio-RAD电泳系统按说80V（电源电流要调到最大，我们是400mA）最多跑2-3小时，我怀疑是LZ的buffer问题，或者是电源没有设置好
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tewank[使用道具]
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发表于 2014-1-7 11:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 yjf1026 的帖子

谢谢二楼。
我的buffer：Tris3.03g，甘氨酸18.77g，SDS1g，定容至1L。
PS：我们实验室的Tris是很久以前的了，会不会有影响呢？？？
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taoshengyijiu[使用道具]
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发表于 2014-1-7 11:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的胶浓度很大吗？
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发表于 2014-1-7 11:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一般跑分离胶用的是80V，浓缩胶100V，一般一个半到两个小时可以跑完
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2014-1-7 11:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是不是你的内槽缓冲液加得不够,导致电流太小,这样跑胶的速度会很慢~
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阿司匹林[使用道具]
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发表于 2014-1-7 14:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
各位大人，小弟我是菜鸟，最近刚开始做western，发现别人跑胶一般都是两个小时结束战斗，但是我的胶要跑六到八个小时，郁闷死我了。我用的是恒压80v跑，的电泳仪，请问是什么原因呢？？？？电泳的时候具体的参数应该怎么调？
谢谢谢谢

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重配一下电泳液吧，Tris也换一下，Bio-RAD是很不错的仪器，应该不会有问题的，你就设置成80V,然后120V吧，浓缩胶30min，分离胶60min的样子吧。还有你的浓缩胶分离胶的浓度是什么？
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发表于 2014-1-7 14:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

以前有次缓冲液加的少了,速度就会比较慢,注意掌握所加缓冲液的量!
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kuohao17[使用道具]
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发表于 2014-1-7 14:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
各位大人，小弟我是菜鸟，最近刚开始做western，发现别人跑胶一般都是两个小时结束战斗，但是我的胶要跑六到八个小时，郁闷死我了。我用的是恒压80v跑，Bio-RAD的电泳仪，请问是什么原因呢？？？？电泳的时候具体的参数应该怎么调？
谢谢谢谢

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除了检查tris有没有问题外，浓缩胶和分离胶的pH非常重要，不合适的话，电泳会跑的很慢，这个我亲身经历过的。
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发表于 2014-1-7 14:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
选择用横流，先30ma跑压缩胶，然后用20ma跑分离胶。10%的胶大概2h。
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