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标题:【求助】包涵体的纯化

changlhsyo[使用道具]
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发表于 2014-1-8 10:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】包涵体的纯化


我做大肠杆菌重组蛋白的表达，要上柱的溶解包涵体含有很多杂带，不知如何除去？因为做亲和层析时，杂蛋白很难除去。大家帮帮忙啊！
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duoduo[使用道具]
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发表于 2014-1-8 10:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
包涵体洗几遍再溶，纯度都应该在70-80%啦，上样没问题。
看不见图？
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am10[使用道具]
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发表于 2014-1-8 10:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

发图片最好用可以直接显示的格式，如jpg，gif。可以用Photoshop或ACDSee等进行转换。
看你的图，虽然是包涵体表达，但是属于那种表达量较低的那种。纯化不好做，只有慢慢尝试各种纯化方法。先把亲和方法条件做透，再试试离子交换。


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2014-1-8 10:50
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changlhsyo[使用道具]
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发表于 2014-1-8 10:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

关键是我赶着毕业呢，亲和层析已经做了好长时间了，太郁闷了！
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发表于 2014-1-8 14:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

过分子筛就可以了啊！包涵体根本不适合做亲和层析。
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发表于 2014-1-8 14:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 7437654 于 2014-1-8 14:27 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

过分子筛就可以了啊！包涵体根本不适合做亲和层析。

这句话有待推敲。
亲和层析的种类很多，包涵体不适合的可能是免疫亲和层析。其他的如金属螯合亲和层析（通常讲的Ni柱）就非常适合。
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lxh031[使用道具]
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发表于 2014-1-8 14:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我就是用Ni柱纯化的，上面的图就是纯化结果。
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发表于 2014-1-8 14:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
换个菌株试试，同时可以改变表达温度...我们实验室有几个本科生就在试表达条件，有的菌株表达可溶蛋白，有的在包涵体里面
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changlhsyo[使用道具]
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发表于 2014-1-8 14:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的目的蛋白49.5kD,杂带大概35-37kD，pI 5.86，感觉杂蛋白的性质与目的蛋白相似，我如果用阴离子交换柱，该用哪种的呢？
请大家帮帮忙啊！
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 小中大

图片中最左边66-45kd之间的那条带是你的目的带么？如果是的话，表达量算挺大的了，你可以试下割胶回收，回收效果挺好的，反正在包含体里，你的蛋白都是变性的，割胶回收的蛋白就是变性的喽
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