【求助】包涵体经纯化柱纯化后做抑菌试验有活性

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标题:【求助】包涵体经纯化柱纯化后做抑菌试验有活性

雪花子[使用道具]
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发表于 2014-1-8 15:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

包涵体经纯化柱纯化后做抑菌试验有活性，有问题吗，一般包涵体表达的单不是都没有活性的！

duoduo[使用道具]
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发表于 2014-1-8 15:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 雪花子 于 2014-1-8 15:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

包涵体经纯化柱纯化后做抑菌试验有活性，有问题吗，一般包涵体表达的单不是都没有活性的！

具体说说怎么做的抑菌实验

雪花子[使用道具]
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发表于 2014-1-8 15:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我做的重组蛋白是溶菌酶，溶菌酶对革兰氏阳性菌抑菌效果明显，纯化后，在LB平板涂布金黄色葡萄球菌，等距放3牛津杯，对照不加纯化产物，其他2个分别加入50 和100微升的纯化产物，37度培养15-16h发现加100微升的抑菌圈比较大.

雪花子[使用道具]
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发表于 2014-1-8 15:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

纯化用的是安玛西亚公司的His-Trap 1ml柱
1. 包涵体分离试剂
细胞裂解液: 20mM Na3PO4，500mM NaCl，pH 7.4
包涵体洗涤液：20mM Na3PO4，500mM NaCl,0.1% Triton X-100，2M Urea，pH 7.4
包涵体变性液：20mM Na3PO4，500mM NaCl,8M Urea，pH 7.4
2.亲和层析试剂
洗脱液A：20mM Na3PO4，500mM NaCl,8M Urea,20 mM 咪唑, pH 7.4，0.45μm滤膜过滤后使用。
洗脱液B：20mM Na3PO4，500mM NaCl,8M Urea,500 mM 咪唑, pH 7.4，0.45μm滤膜过滤后使用。

H2O[使用道具]
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发表于 2014-1-8 15:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

无论是什么原因，反正不可能是由蛋白质引起的抑菌。
可能是由于尿素，或者咪唑导致的。

BOSS2011[使用道具]
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发表于 2014-1-8 15:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你的包涵体处理盐浓度都很高啊，不管是洗涤还是变形
另外问下，你变性条件下，HIS纯化的效果如何呢？
过柱后的蛋白有没有再做复性实验？

duoduo[使用道具]
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