小中大
哈哈哈!终于看见有一个和我基本相同遭遇的同仁了,我也是没有恒温培养箱的,也作过和你类似的事情。建议:
1、感受太的效率最好还是确定一下,也就是用空载体做个阳性对照,效率不一定不好的。我觉得一般的转化CaCl2也不错啊,很多实验室都用不仅就是因为省钱了,毕竟也是比较实用快捷的方法。
2、这个是个人想法不知道对吗,没有做更多实验区证实过。我个人感觉可能在你所谓的静态培养的条件下载体的抗性基因没有能按预计的时间表达出来,所以显示不出来的抗生素的抗性,也就没有阳性转化菌了。我曾经做过1小时内的涂板基本不长菌,可是过夜的菌液却可以得到较多的菌落。我个人感觉是正如原核表达目的蛋白一样,诱导表达时候最好到一定OD,也就是细菌有一定数量,同时也有较好生长状态的时候,如此才能得到好的诱导结果;同样,感受态复苏需要时间,静止时容易下沉,同时生长也不会那么好,是否影响了抗性表达?我不确定,你可以试一下,顺便告诉我结果。