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5%浓缩胶,10%分离胶
10% SDS-PAGE蛋白电泳
1.配制分离胶(12%,10ml):蒸馏水4ml;30%丙烯酰胺3.3ml;1.5mol/L Tris(pH8.8)溶液2.5ml;10%SDS 100μl;10%过硫酸铵100μl;TEMED 4μl。
2.灌制分离胶,并用少量的乙醇液封。
3.待分离胶凝后(约25min)配制浓缩胶:(5%,5ml):蒸馏水3.4ml;30%丙烯酰胺830μl;1.0mol/L Tris(pH6.8)溶液630μl;10%SDS 50μl;10%过硫酸铵50μl;TEMED 5μl。
4.除去乙醇后,灌制浓缩胶并插入样品梳。
5.待胶凝后,拔出样品梳,在电泳槽中加入1×Tris-Gly电泳缓冲液,用移液枪吸取样品至加样孔。
6.以恒压60V电泳,至溴酚兰到达浓缩胶底部。
7.以恒压120V电泳,至溴酚兰到达分离胶底部。
8.剥胶,用考马斯亮蓝R250染色数小时,脱色。