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标题:【求助】500多kDa蛋白WB的问题

flyxx05[使用道具]
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发表于 2014-1-14 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】500多kDa蛋白WB的问题


手头有一个抗体，他的天然抗原是500多kDa的蛋白，请问要怎样才能做WB鉴定啊，谢谢
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DNA[使用道具]
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发表于 2014-1-14 16:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 flyxx05 于 2014-1-14 16:12 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

手头有一个抗体，他的天然抗原是500多kDa的蛋白，请问要怎样才能做WB鉴定啊，谢谢

500多K的蛋白不太好做啊
有中型电泳槽吗？
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daod[使用道具]
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发表于 2014-1-14 16:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果有条件，Bio-Rad 公司有大电泳槽，跑低浓度分离胶（6-7%）SDS-PAGE. 若条件不允许，可用常规的小电泳槽尽量跑低浓度分离胶，时间跑长点，试试。
另外，你若只是做鉴定，不妨试别的方法，如Dot blot或ELISA，这样可以避免蛋白太大的问题。
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发表于 2014-1-14 16:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

哈哈，我的240多KDA的做了2个月，不停的做，都没有做出来，500，有难度。但功夫不负有心人！只要努力肯定能成功。
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-1-14 16:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

只要目的蛋白提取出来了
没什么难度
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2014-1-14 16:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的273KD，不知道怎么控制条件呢
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发表于 2014-1-14 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问四楼的内参用的什么？
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发表于 2014-1-14 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的273KD，不知道怎么控制条件呢

===================

8%分离胶
湿转：300mA 2h30min
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2014-1-14 16:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
转膜是个问题，最好湿传，半干转的话，可能到后面会烧胶
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mimili_901[使用道具]
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发表于 2014-1-14 16:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
二百多好做，用10%甲醇的缓冲液，8%的胶，半干可以转出来，我做过，20%甲醇的缓冲液就不好作出来，时间不记得了，应该是半个小时左右，电压时16V，是伯乐的半干转印仪
听老板说有加琼脂糖的特殊sds=page配方，能够做500KDA的，不过没有找到
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