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标题:【求助】蛋白样品量太小,太稀怎么办?

seagate[使用道具]
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【求助】蛋白样品量太小,太稀怎么办?


请教各位,我从材料中提取的蛋白量太小,浓度太稀,没办法进行分离纯化,而且必须保持活性。应该怎么办呢?
丙酮浓缩似乎失活,损失太多。
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rxcc33[使用道具]
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有专门的超滤管,可以浓缩蛋白,可以根据你分子量来选择你需要的超滤管,merk公司有这样的超滤管。
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flower-201[使用道具]
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可以装透析袋中,用聚乙二醇20000浓缩。
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avi317[使用道具]
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看你液体的量有多少,以上两位都是很好的建议,样品少就用超滤关(15ml和50ml的规格可能适合你)。多的话装透析袋还行,注意透析袋内表面会有一定量的吸附(你的蛋白尤其要注意)。还有,如果样品量特大或特小可以用硫酸铵沉淀(注意pH值不要太接近等电点),多次离心收集沉淀再用少量缓冲液复溶(我就是这么干)。有的人也用冻干浓缩,你可以试试。
*冻干方式蛋白损失最少。
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seagate[使用道具]
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谢谢以上几位!超滤管我周围似乎没怎么听说,能否提供一点介绍?
几种方法对活性影响如何呢?
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flower-201[使用道具]
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超滤管merk公司和Millipore都有,外表看起来和普通的15ml和50ml离心管一样,实际上超滤管管体分为两层,内层有不用规格孔径的膜,在离心状态下使用。
具体你可以问上述公司的销售(单个买大概60-80,太贵,我们很少用。)超滤、透析袋浓缩对活性基本没有影响。关键是你蛋白的特性了,一般是4°就没问题;
硫酸铵沉淀容易引入杂质(可以通过复溶后离心去掉),蛋白溶液加入硫酸铵后pH值会下降一点,缓冲液远离等电点的就好,蛋白在硫酸铵中很稳定,有些时候蛋白在高浓度硫酸铵中4°长期保存;
冻干方法看你蛋白的稳定性了,有些蛋白冻干后复溶后不是很好,如果复溶不彻底,有类似絮状物,活性肯定就下降很多。
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ladyhuahua[使用道具]
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可用Microcon Centrifugal Filter Devices浓缩。
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ladyhuahua[使用道具]
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用冻干机浓缩
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eve_49[使用道具]
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浓度低的话一般就是沉淀浓缩吧
然后在选合适体积溶解
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dog002[使用道具]
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你提取的是总蛋白还是目标蛋白?无论是透析还是超滤都有一个截留分子量的问题。另外你的浓度有多低?无论使用什么方法太低的浓度往往损失会非常大。我们一般浓缩小于100ng级的蛋白回收率往往会低于50%(超滤法),而冻干也会因为液体量太大导致效果不佳。
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