小中大目前我在做一个6k分子量的蛋白，用20%的分离胶，同样也是湿转，已有阳性结果。个人感觉转膜条件的选择可能更趋向于你使用的仪器，比如目前我的转膜条件为15V转2小时（电流大致稳定在110mA-130mA间），而之前我做过一个170k的大分子蛋白，条件为20V两小时，基本变化不大。还有小分子蛋白可以考虑使用pvdf膜，虽然同为0.22um孔径。再有就是你的电泳情况了，不要跑的太下面，早点下胶，小分子蛋白容易越跑越宽的。最后就是我曾经遇到的问题，就是转膜的时候三明治结构做得不好，没有完全夹紧，当时的结果就是条带弥散而且非常淡。
以上，希望有所帮助。
