小中大
我认为有以下原因:
1 PBS的体积太大,导致你的目的蛋白浓度过稀。
正确。菌液取得太少,PBS的量太大。一般摇瓶培养的菌,100ml菌液对应的破菌液为10-20ml。
2 OD为0.8时已过了菌的对数生长期及生长后期,可能菌表达目的蛋白的能力已大大下降。
不同意。个人认为表达与OD无太大关系,只是与培养基成分的变化有关。虽然很多手册都强调所谓的最佳诱导OD值,你实际做做就会发现没多大关系。最直观的例子就是发酵罐,它开始诱导时的OD值可远远不止这个0.8。
此外,超声时产生大量的泡沫很正常,超声应在冰上操作。
错误。超声时应该完全没有泡沫。泡沫是蛋白质变性的标志之一。超声产生泡沫的原因主要在于你的超声体积太小了,而所用的超声探头直径太大了。
超声不是在冰上操作,而是在冰水浴中操作。这样才能使超声产生的热量快速散发。
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