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标题:【求助】为什么我的蛋白条带是波浪状？

iii_ii[使用道具]
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发表于 2014-1-14 23:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】为什么我的蛋白条带是波浪状？


跑完电泳，把胶做了考马斯亮蓝染色，我发现上样量要是很大（20ul），蛋白条带就呈有波浪样，越靠近下部越明显。上样量小时（5ul,10ul）还挺直的。我蛋白浓度是1-2ug/ul.帮我分析下吧！总是这样好烦！对了 SOD,TRIS,AP,新配的，与用旧的相比差别不大，但相对好一点！！
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taoshengyijiu[使用道具]
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发表于 2014-1-14 23:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

上面一层的胶没有压直就加电压了吧？
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松子儿[使用道具]
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发表于 2014-1-14 23:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不知和电泳液有关不？等待高人指点！
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2014-1-14 23:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能是：1、胶要凝得均匀，装胶时漏得厉害就不行
2、电压不能太大
3、样品中的盐离子浓度高，需脱盐。
4、电泳缓冲液，胶缓冲液的PH值要对，最好是新配的
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发表于 2014-1-14 23:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我有这样一种想法。我们这灌胶的时候主要是看水与分离胶之间出现明显的折线，但有时候折线很快出现（15-20分钟），但烧杯里剩余的胶50分钟左有才凝，我发现这样的胶做得考马斯亮蓝染色条带就分不清，不知道是不是胶凝得不好的表现？
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发表于 2014-1-14 23:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
盐离子浓度高是怎么造成的？怎样脱盐？
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发表于 2014-1-14 23:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

在基层胶中压得挺值的，而且一般都是到了分离胶后才改变电压。梳子孔没看出来不平，再说经过基层胶不是会压平吗？
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misswu61[使用道具]
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发表于 2014-1-14 23:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我样品的盐离子浓度也很高，但是没有出现过波浪状的条带呀
楼主跑的时候温度控制的怎么样呢？
胶凝得不好也可能会导致跑出来的条带不理想，折线很多时候给的不是真实情况，一般杯子里面的剩胶会比玻璃板里面的胶凝得早很多的。
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vvmmoy[使用道具]
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发表于 2014-1-14 23:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

为什么我的蛋白条带是波浪状？
1、上样体积过大可以导致，设法减少体积（提取蛋白同样条件下减少裂解液）。
2、胶配的有问题，“越靠近下部越明显”说明你的胶不好。如果你在收胶的时候仔细看（把玻璃板表面去离子水洗干净）会发现下部有波浪状，即胶凝的不够均匀，自然会出现波浪状条带了。
与 SdsTRIS,AP 等关系不大。
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发表于 2014-1-14 23:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

胶的下方（不是胶里面）有气泡，卡在两块玻璃板中间了
导致胶内的电流不一致
越靠下越明显
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