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标题:【求助】请问大鼠的肌肉组织和心肌组织做WESTERN BLOT ...

duoduo[使用道具]
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发表于 2014-1-15 11:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】请问大鼠的肌肉组织和心肌组织做WESTERN BLOT ...


小妹最近在做小鼠心肌组织和骨骼肌组织的 WESTERN BLOT，内参选用的是B-ACTIN,但是一直做不出条带，在丁香园上翻阅了以前的帖子说是心肌组织和骨骼肌组织不应该选用B-ACTIN为内参，但是具体用何种内参，帖子上也没有提及，所以想请问各位大侠，做心肌组织和骨骼肌组织究竟选用何种内参比较好？万望各位大侠出手相助，感激涕零！
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ukonptp[使用道具]
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发表于 2014-1-15 11:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 duoduo 于 2014-1-15 11:07 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

小妹最近在做小鼠心肌组织和骨骼肌组织的 WESTERN BLOT，内参选用的是B-ACTIN,但是一直做不出条带，在丁香园上翻阅了以前的帖子说是心肌组织和骨骼肌组织不应该选用B-ACTIN为内参，但是具体用何种内参，帖子上也没有提及，所 ...

呵呵
我以前就用beta-actin
偶尔也用beta-tubulin与GAPDH
心肌与骨骼肌组织中beta-actin的量非常大
不出条带是你的系统有问题吧（很可能是抗体）
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duoduo[使用道具]
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发表于 2014-1-15 14:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢老师的回答，同时我还想问一下，请问如果我换用A-ACTIN 或者是GAPDH的话，哪种会更好？可以再骨骼肌和心肌中都表达出来条带？谢谢老师的回答！
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nvdabing[使用道具]
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发表于 2014-1-15 14:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
GAPDH很好出，上海康城还可以国产就不错。
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发表于 2014-1-15 14:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我碰到过类似的问题，当时做大鼠和小鼠的心脏匀浆，然后看蛋白表达，当时做内参用actin, gapdh, tubulin 都试过（按次序），后来只有用tubulin才能出来，所以你可以试试tubulin。祝你成功！
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发表于 2014-1-15 14:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

tubulin表达强
gapdh也可以
不过最省钱的办法是丽春红把膜染个色然后直接扫描。。。然后调成黑白。。。然后还可以把丽春红洗掉再开始杂目的蛋白~~~哈哈
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u234[使用道具]
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发表于 2014-1-15 14:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们实验室曾经研究心肌肥大，用的是GAPDH做内参，文章已经发表在PNAS上，所以这个内参应该被广泛认可。
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发表于 2014-1-15 14:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做脑，用的是GAPDH,santa的抗体，还可以。
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发表于 2014-1-15 14:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我最近刚做过小鼠的心脏匀浆，用的是上海一家抗体公司的beta-tubulin与GAPDH
效果不错，而且价格便宜
如果楼主需要，我可以给你联系方式
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