小中大【求助】原来表达的蛋白不表达了
大家好，我原来用pET28a载体在BL21（DE3）中表达，蛋白表达量很高，可是包涵体的形式，经过几次复性不成功后，决定更换载体和菌株来进行可溶性表达。结果原来表达的质粒pET28a在Rosetta（DE3）中没有表达，我觉得很奇怪，只是更换了一下菌体，应该对表达没有太大影响吧。
另外将目的基因插入pET32a中进行融合表达（含油Trx、s、His等标签），转化BL21（DE3），也是没有表达。
因为原来pET28a在BL21中表达的很好，只是蛋白为包涵体，而Rosetta Gami 系列据说可以促进表达蛋白的溶解性，所以拟将pET28a转入Rosetta Gami 中，但问题是pET28a为Kana抗性（50ug/ml），而Rosetta Gami 是三种抗性（Kana
15ug/ml，CM34ug/ml, tet 12.5ug/ml),两者都带有kana抗性，只是浓度不同，我用高浓度的kana筛选不知道可以吗？
疑问很多，希望做蛋白表达方面的朋友多多帮忙，不吝赐教，本人感激不尽！
