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标题:【求助】western底片背景很黑。

冰岛老叟[使用道具]
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【求助】western底片背景很黑。

请教各位大哥大姐,小弟我初做western,昨天得到结果,可是整张片子如下,背景很深,而且有很多黑的,是我封闭不够呢,还是浸泡好显色液后,没有吸干,小弟很迷惑,恳请那位知道的大哥不吝赐教。谢谢。


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2014-1-16 16:32
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yes4[使用道具]
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回复 #1 冰岛老叟 的帖子

二抗浓度有些高
封闭应该没有问题
没有完全吸干也不会有这样深的背景
胶片有没有走光?
我觉得如果你调整二抗浓度后背景仍旧这么高的话可以尝试换ECL
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冰岛老叟[使用道具]
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谢谢冯大哥指导,我同时做的pcna做还不错。背景很干净。当然pcna是最后浸泡ecl液体的。要么是ecl发光液配置后不能马上用,因为前面泡了3张膜,背景都很深,到最后张pcna的,就好了。所以现在很迷惑。


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莲花白[使用道具]
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应该不是胶片的问题了
能不能把你最后曝光的程序写一下,用的什么工具,好具体分析
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冰岛老叟[使用道具]
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我是这样做的,膜用tbs-t洗涤好后,加入碧云天ecl plus发光液a,b液各1ml混匀,放置于保鲜膜上,然后把膜在ddH2O中浸泡漂洗几秒钟后,将水滴下少许,放置于前面做好的ecl plus液中,约1min,正反两面都浸泡(当中翻转膜一次),放置在另一张保险膜上,为了让膜上残留的ecl液体可以去掉点,这里没有用吸水纸吸,然后用保鲜膜包裹(有可能保险膜太大,所以我把边上多余部分包在膜上面,)放置在片夹中,进暗示曝光,曝光时间不长,最多2min,放入显影液中,显影液之前用过一次,效果比这次好多了,水中漂洗,然后定影。pcna同样方法做,不同的是,那张膜是最后浸泡ecl液。恳请各位大哥不吝刺激,万分感谢。
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ladyhuahua[使用道具]
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封闭的时候是不是两张膜叠在一起了,有一张没封闭上,我以前遇到过这种情况
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冰岛老叟[使用道具]
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我都是每张膜分开来单独封闭的。
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lxh031[使用道具]
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8
 

认认真真重复一次!
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glass[使用道具]
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9
 

western真太难做了。
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eric930[使用道具]
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也许你的蛋白浓度太高。
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