【求助】蛋白质复性的问题

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标题:【求助】蛋白质复性的问题

cj_mondy[使用道具]
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发表于 2014-1-17 17:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我目前纯化一个His标签的蛋白，Ni-NTA柱子纯化的，用的8M尿素变性，复性梯度为6M,4M,2M,1M,但是复性过程中，到了2M的梯度时出现很多沉淀，试了几次都是如此，透析蛋白的浓度在0.4mg/ml，请问高手有没有合适的复性方法啊？

u234[使用道具]
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发表于 2014-1-17 17:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

尿素浓度变化太快，复性是个比较漫长的过程，如果你一定要透析到4M尿素以后就要逐渐降低尿素浓度，延长透析时间以使蛋白质正确折叠。

qhyu[使用道具]
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发表于 2014-1-17 17:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我是4M过夜的，然后换的2M，不过还是出沉淀了！

987789[使用道具]
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发表于 2014-1-17 17:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

蛋白太个性，复性太复杂

changlhsyo[使用道具]
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发表于 2014-1-17 17:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1、看起来，楼主用的是阶段复性吧？！可以考虑用“梯度”——条件变化温和，减小沉淀出现的可能。
2、透析或者超滤出去，但条件变化也要温和一些。
3、如果所有方法都不管用，只好离心去掉沉淀了，不过这种办法对于制备工艺开发不太好，收率会减低很多。
4、可以小量制备一些，测定一下活力等，你关注的指标，没准是因为你的载体的问题！！！

one[使用道具]
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发表于 2014-1-17 17:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

在柱子上复性，阻断蛋白分子间的聚集，很有效的

huifeng0516[使用道具]
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发表于 2014-1-17 17:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我觉得最主要问题是楼主在蛋白复性时起始浓度过高，应该低于40ug/ml，复性后再浓缩，保存。浓度高很容易在4m至2m尿素时析出

cj_mondy[使用道具]
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