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标题:【求助】蛋白在BL21(de3)和Rossete(de3)中的表达疑问

am10[使用道具]
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1
 

【求助】蛋白在BL21(de3)和Rossete(de3)中的表达疑问


前一段时间构建了pet28质粒 在BL21(DE3)中没有表达
听坛内高人指点DE3菌中CCC的含量近似零,所以构建了新的
质粒放在DH5a中,可以正常表达了。
问了验证稀有密码子的问题,将pet28转入Rossete(DE3)
也能正常表达,并有活性。
疑问,同是大肠杆菌为什么DH5a就能表达。为什么DE3的菌
就不能表达ccc等。
求高人给个指点,最好有文献支持,谢谢
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jkobn[使用道具]
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这个纯属偶然现象。我表达的很多基因都含 ccc ,可以在 BL21(DE3) 中表达。
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redbutterfly[使用道具]
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3
 
前一段时间构建了pet28质粒 在BL21(DE3)中没有表达
听坛内高人指点DE3菌中CCC的含量近似零,所以构建了新的
质粒放在DH5a中,可以正常表达了。
问了验证稀有密码子的问题,将pet28转入Rossete(DE3)
也能正常表达,并有活性。
疑问,同是大肠杆菌为什么DH5a就能表达。为什么DE3的菌
就不能表达ccc等。
求高人给个指点,最好有文献支持,谢谢

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pET28
怎么可能在DH5A里表达?
pET28是T7启动子,需要T7RNA聚合酶才能进行表达目的基因,大肠杆菌DH5A本身没有DE3区,也不带T7 RNA聚合酶这个酶
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am10[使用道具]
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4
 
嗯,我构建的新的质粒
使用的阿拉伯糖启动子的 在DH5a里面表达的
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remenb[使用道具]
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5
 

ROSETTA 自身带一组mRNA质粒,能合成大肠杆菌缺乏的稀有密码子的氨基酸
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am10[使用道具]
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6
 

谢谢回答。
但是为什么都是大肠杆菌,DH5a就可以呢?
另外有楼上说CCC他的基因也能表达。是否因为我的CCC基因较多的原因不能表达,需要专用菌株,而CCC在BL21内也是有的,接近零但是不等于零?
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remenb[使用道具]
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7
 
为什么DH5A能表达,BL21(DE3)不表达
这个我想载体和启动子和表达菌三者都不一样,很难说清为什么
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lxh031[使用道具]
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8
 

谁那有这几个菌和载体的详细资料发上来大家参考下~~
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mimili_901[使用道具]
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BL21(DE3)
F– ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5])
an E. coli B strain with DE3, a λ prophage carrying the T7 RNA polymerase gene and lacIq
Transformed plasmids containing T7 promoter driven expression are repressed until IPTG induction of T7 RNA polymerase from a lac promoter.
Derived from B834 (Wood, 1966) by transducing to Met+.
See the original Studier paper or the summary in Methods in Enzymology for more details.
DH5α
F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG Φ80dlacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169, hsdR17(rK- mK+), λ–
An Hoffman-Berling 1100 strain derivative (Meselson68)
Promega also lists phoA
nalidixic acid resistant
References:
FOCUS (1986) 8:2, 9.
Hanahan, D. (1985) in DNA Cloning: A Practical Approach (Glover, D.M., ed.), Vol. 1, p. 109, IRL Press, McLean, Virginia.
Grant, S.G.N. et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 4645-4649 PMID 2162051.
Meselson M. and Yuan R. (1968) Nature 217:1110 PMID 4868368.
详见 cuturl('http://openwetware.org/wiki/E._coli_genotypes#BL21.2E3.29')
至于质粒的信息,网上多如牛毛,详见 cuturl('http://www.google.com/advanced_search?hl=en')
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