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标题:【求助】 急问120kd蛋白的转膜条件

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发表于 2014-1-18 16:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】 急问120kd蛋白的转膜条件

最近一直在做western，47kd的蛋白用普通发光液一直显不出条带，用灵敏发光液，每次背景都很深，该怎么办呢？而且120kd蛋白用250mA转膜3h，发现根本就没转上去，Marker也转的不完全，急问该蛋白的转膜条件啊，多谢
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发表于 2014-1-18 16:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你用的是湿转还是半干转？是不是检测指标本身含量就很少？
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发表于 2014-1-18 16:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 glass 的帖子

我用的是湿转，蛋白量少怎么办啊
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发表于 2014-1-18 16:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
说说你检测的是什么指标吧，那种细胞株，用的那家抗体，稀释比例，我看看这个蛋白我有没有做过。
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发表于 2014-1-18 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

NFAT1，用的是abcam的一抗，二抗是进口分装的
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发表于 2014-1-18 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

湿转的话试着用350毫安，转2小时，我们一直用这个条件。有没有检查一下你的转膜缓冲液配制有没有问题。你做的这个蛋白我没有做过，抱歉抗体方面不能给你什么意见了。
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发表于 2014-1-18 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

好的，多谢了，我试试您说的条件
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发表于 2014-1-18 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问楼上的的，120KD的分子如果用半干法转膜条件是什么用的呢？我做过15V、2h，效果不好，目的条带基本看不到
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发表于 2014-1-18 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

强烈建议购买western blot MARKER(内含120kd条带可以参考）
120kd的蛋白湿转100mA，1.5小时足以，试验例子：
cuturl('http://www.haigene.cn/western_marker.html')
cuturl('http://www.haigene.cn/rapid_western_kit.html')
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avi317[使用道具]
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发表于 2014-1-18 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用的是湿转，蛋白量少怎么办啊

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蛋白量少使用超敏western 试剂盒，是常规方法的几十倍灵敏度。
cuturl('http://www.haigene.cn/rapid_western_kit.html')
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