【求助】sephadex g-100纯化分子量为78kd的蛋白

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标题:【求助】sephadex g-100纯化分子量为78kd的蛋白

eve_49[使用道具]
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发表于 2014-1-18 17:16 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我用sephadex g-100纯化阳离子交后的样品，可一直检测不到有蛋白的流出，
上样的样品量浓度已经达到mg级了，利用bsa过柱就能检测到样品的流出。大家帮我分析分析，我都急死了

redbutterfly[使用道具]
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发表于 2014-1-18 17:16 资料个人空间短消息加为好友

小中大

信息给的太少,到底是手工柱还是预装柱啊,是连着AKATA用的?

eve_49[使用道具]
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发表于 2014-1-18 17:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

是手工装柱，不是akta的仪器，自己联的核酸蛋白检测仪，现在出来峰了，可是峰型太宽，且信号很弱

11_hjx[使用道具]
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发表于 2014-1-18 17:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

sephadex G 100 胶体很软，手工想要装出柱效好的柱子很难。
你说的峰型太宽是与这个柱子分离其它蛋白做比较的结果吗？注意下流速，看看是不是柱子压的太紧了导致流速降低。
峰型宽了浓度就会低，信号就弱了。
你说的mg级是mg/ml吗？我用预装柱分离mg/ml的样品出来的峰都很低，G100就更……

eve_49[使用道具]
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发表于 2014-1-18 17:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

恩，是与其他蛋白比较，用bsa过了一下sephadex g-100的，由于bsa用的浓度较高，16/60规格的柱子上样量为200ul,浓度为50mg/ml，所以峰比较窄，信号也比较好，可是一换上目的蛋白其峰的宽度就很宽，导致样品稀释很大，都与后面的分子量很小的杂蛋白重叠了。上样的目的蛋白是mg/ml,现在换了一种填料，sepacryl s-200效果好一些了，预装柱很贵吧，我都自己买填料自己装柱，不知道是不是自己装柱的技术不好，还是别的什么原因。

eve_49[使用道具]
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发表于 2014-1-18 17:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

流速就是说明书提供的标准流速，流速越低其分离效果应该越好吧

fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-1-18 17:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

G系列凝胶分辩率太差，几乎不能用来分离蛋白，G25脱盐还行。
换其他，如superdex系列试试吧

greenbee[使用道具]
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