【求助】蛋白在超滤过程中沉淀了。

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标题:【求助】蛋白在超滤过程中沉淀了。

bs4665[使用道具]
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发表于 2014-1-18 17:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我做原核表达，蛋白在包涵体中，我用尿素溶解后，过NI柱，然后把过完柱的样品用超滤管超滤，将溶解液换成生理盐水，准备打兔子，制抗体。但是在超滤的过程中，蛋白都沉淀了下来。该怎么解决呢？哪位专家帮帮忙！

7437654[使用道具]
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发表于 2014-1-18 17:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

换成生理盐水后肯定要沉淀，建议先对蛋白进行复性，复性完毕后，再做你想做的事情吧。一般过完ni柱的蛋白浓度足以进行免疫，难道你的超率是要提高蛋白浓度吗？

bs4665[使用道具]
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发表于 2014-1-18 17:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我超滤是为了除去尿素和其他盐离子。

PINK[使用道具]
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发表于 2014-1-18 17:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你去除尿素后蛋白肯定肯定沉淀出来，蛋白还没有来的急折叠复性呢。
先复性！

DONT[使用道具]
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发表于 2014-1-18 17:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可以加入SDS溶解你的包含体。然后在超滤除去尿素，有SDS不容易乳化，可以用AD11乳化剂。

wu11998866[使用道具]
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发表于 2014-1-18 17:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼主试试在透析液中加入终浓度0。2 % MgCl 2
还有我遇到过一次这种情况，
当时忘记了，直接拿水做的透析
所以沉淀了，但是蛋白并没有完全失去活性
不知道你的这个蛋白什么情况
考虑到你是要打兔子的
我认为楼上说的SDS虽然可行，但是不适合你的试验目的

abc816[使用道具]
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发表于 2014-1-18 17:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

还有一种情况，就是透析外液的离子强度问题，如果透析外液的离子强度太低会影响蛋白的溶解，就会出来沉淀。所以出现沉淀并不能一定说明是透析复性不成功

abc816[使用道具]
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发表于 2014-1-18 17:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

另外中空纤维的超滤本来可溶的蛋白经常会出来沉淀，可能换成透析袋或膜包超滤情况会要好很多，可能是超滤的过程带来了蛋白变性

u234[使用道具]
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发表于 2014-1-18 17:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

看你免疫的目的是什么？如果只想得到针对一级结构的抗体，免疫前是不需要复性的，如果要得到针对天然结构的抗体就要先复性在乳化后免疫。