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标题:【求助】请各位大侠帮忙分析一下电泳图的问题

kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2014-1-19 10:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】请各位大侠帮忙分析一下电泳图的问题

小弟我最近跑了几张电泳图，还请各位大侠帮忙给分析分析原因，小弟在此先行谢过了！
实验材料是蝴蝶兰花芽。第一张图是用的TCA/丙酮法，上样量大概为900ug左右，染色使用的是考马斯亮蓝G-250，胶条是用的17CM、PH4-7。第二张图是用的酚抽提法，上样量大概650ug左右，染色是用的R-250，胶条是用的17CM、PH3-10。
电泳条件如下： 50V 主动水化 12h
250V 线性 1h
1000V 快速 1h
4000V 线性 1h
10000V 线性 5h
10000V 快速 70000Vh
500V 快速 24h
二相使用的的是12%SDS-PAGE胶，电泳条件如下：
1W 10min
7W 5h
还请大家多多帮忙！万分感谢！


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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2014-1-19 10:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这是第二张图：


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发表于 2014-1-19 10:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 kewanqi2011 于 2014-1-19 10:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

这是第二张图：

这种下雨状的竖条纹最有可能的原因是平衡的时候不够充分，SDS-没有充分包裹的缘故
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2014-1-19 10:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #3 njkph 的帖子

我平衡的时间是每次15分钟，第一次平衡：6ml平衡缓冲液+60mgDTT，第二次平衡：6ml平衡缓冲液+150mgIAA。那么解决这么问题的话就是要增加平衡的时间就可以吗？
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njkph[使用道具]
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发表于 2014-1-19 10:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那这样看来你的平衡还是没有什么问题的，另外还有两个原因，请仔细检查并确定无误：配置凝胶溶液的Tris-HCL是否ph=8.8（+-0.1ph），电泳缓冲液是否配置无误（特别是SDS的量是否正确），其中前面一个原因也是很可能的
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njkph[使用道具]
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发表于 2014-1-19 10:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
另外，平衡缓冲液多用一点，估计用10ml可能更好一些！时间是够了！
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