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标题:【求助】BDNF和NGF的Western Blotting转印条件

douding66[使用道具]
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发表于 2014-1-19 12:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】BDNF和NGF的Western Blotting转印条件


正在做BDNF和NGF的Western Blotting，但是转膜这一步一直做不好，请求大家的帮助。
我们实验室只有湿转的转印槽，已经试过了60V和30V的 15min，30min，45min，60min，75min，90min，105min和120分钟，在10-17KDa Marker之间没有看到条带，大分子量条带倒是越来越明显。膜用了NC膜和PVDF膜都试过。
正在积极摸索条件之中，但是。。。。。。
希望得到大家的帮助，谢谢！
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3648755[使用道具]
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发表于 2014-1-19 12:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

30V的话要转过夜，最好用恒流，我用230ma，2h，你的目的在10-17KDa之间的话试试0.2微米孔径的膜。
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douding66[使用道具]
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发表于 2014-1-19 12:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 3648755 于 2014-1-19 12:00 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

30V的话要转过夜，最好用恒流，我用230ma，2h，你的目的在10-17KDa之间的话试试0.2微米孔径的膜。

谢谢，我改恒流再看看。
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发表于 2014-1-19 12:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
现在你的BDNF做出来么？我们的每次都在40kd左右的出现条带
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tudou85[使用道具]
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发表于 2014-1-19 12:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

恩？BDNF应该是28KD啊
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发表于 2014-1-19 12:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也做BDNF，也是小分子量的不出条带，28KDa左右倒是挺显，而且靠近55KDa~43KDA附近也有一条很浅的带子。请高手指点迷津。
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orangecake[使用道具]
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发表于 2014-1-19 12:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问你们BDNF的抗体用的那个公司的？
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orangecake[使用道具]
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发表于 2014-1-19 12:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们最近也在做BDNF，可是怎么换条件也不出结果
我用的chemicon的抗体。 剪膜在28KD左右。
大侠指教
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douding66[使用道具]
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发表于 2014-1-19 12:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没想到这么多人都在做这个抗体，呵呵，把我现在的情况说一下：
BDNF是买的abcam公司的，很贵，开始没做出来的时候一直怀疑是抗体有问题，还写了投诉信去公司质问，现在出现的条带在35KDa附近，把图片发到abcam公司，回复说就是目标条带，28KDa。基本上稳定在35KDa附近。
谢谢vivian007 战友的回复，现在用的转印条件是230mA，120min，丽春红染色结果很均匀。
希望对大家有点帮助！
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yyaxw84[使用道具]
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发表于 2014-1-19 12:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也是每次都在40左右出条带啊，可说明书上是30/14Kd，我做的是大鼠的海马组织，Santa的抗体，有没有朋友知道是为什么啊？marker肯定是没问题的，因为我内参是３７Ｋｄ的，都在其下方去了。
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