【求助】PVDF膜如何回收

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标题:【求助】PVDF膜如何回收

standup[使用道具]
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发表于 2014-1-19 12:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问显影过后的PVDF膜如何回收，膜上的蛋白能洗下来吗？若不能洗下来，那下次抗体孵育的时候会不会和以前转上去的蛋白结合啊。是不是因为以前那个部位的蛋白被抗体结合过了，不会再结合了？

lorri[使用道具]
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发表于 2014-1-19 12:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼主不是写的太明白，是准备一张膜转两次，还是两次孵育抗体？
转两次没有做过，恕在下孤陋寡闻也没有听说别人做过，孵育两次很简单，分子量不同的可以直接做，甚至可以混合抗体做，但是如果不用膜再生，两个条带都会显出来的。

whitesheep[使用道具]
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发表于 2014-1-19 12:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼主是想问一张膜能不能转两次吧？

ztonyc[使用道具]
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发表于 2014-1-19 12:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

发色后的PVDF膜只靠TBST洗，原来的一抗二抗洗不掉！必须用strip buffer才能去除干净。
我有先例：一次做western检测转化蛋白的表达，先用蛋白FLAG标签抗体做，条带很清楚；之后想用蛋白特异性抗体检测一下，把膜泡PBST中过夜，又洗了N次，结果显出的条带特像前一次的。
所以用内参做了试验：