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标题:【求助】急求酶活力km值的算法，毕业论文用

daod[使用道具]
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发表于 2014-1-23 16:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】急求酶活力km值的算法，毕业论文用


急切请教各位站友，我的毕业论文马上就 要到期上交打印送审了，昨天才把实验数据补好。
我主要做的是一个纯化后酯酶的活性测定，我设计了几个不同浓度的底物浓度，然后测定几个不同浓度的底物的酶活力，得到了几个相应不同的Vmax值，用的是酶标仪的动力学测定法，我想请教各位我该如何算出km值呢，生化书上有个Lineweave-Burk 双倒数作图公式，但不知如何使用，有
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taoshengyijiu[使用道具]
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发表于 2014-1-23 16:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个不需要什么软件的，双倒数作图主要是用底物浓度和反应速度的双倒数作图，做出双倒数图之后，会得到一条趋势线方程式。感觉Km值是可以直接从方程式里面读出来的。具体的你还是自己看看，现在主要的不是什么软件，而是你自己是否有办法获得反应速度值。有了KM和底物浓度就可以知道kcat。一般的酶动力学系数就基本了解了。
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daod[使用道具]
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发表于 2014-1-23 17:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我主要用的是酶标仪测的数据，结果只能得到不同底物浓度下的Vmax，而双倒数作图中用的是反应速度V,这个V和Vmax是不同的吧?想请教下用酶标仪检测的话能得到V吗，还是不能用酶标仪检测啊，只能用分光光度计的方法测得V,然后根据双倒数方程做图就可以求出Km值了？
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BOSS2011[使用道具]
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发表于 2014-1-23 17:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

酶浓度一定的情况下，Vmax 应该是一个固定值，
所以楼主说 “测定几个不同浓度的底物的酶活力，得到了几个相应不同的Vmax值“ 我感觉很奇怪。
Vmax 应该是底物浓度无穷大时的反应速度。
楼主测出来的是不是就是 v 阿？？
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daod[使用道具]
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发表于 2014-1-23 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我实际测出来的就是Vmax, 不是V,因为用的是酶标仪测的，结果出来就只有Vmax,关于这一点，我也不怎么理解，不知道用酶标仪测出的结果为什么没有V,只有Vmax,希望高手能指点一下。如果用普通的分光光度计可以测出V，因为测定方法和酶标仪的动力学方法不同，试剂不一样，手上没有，现在没时间等了，所以只能想想看酶标仪测的结果可不可以用来算Km值。gingivalis站友的意思是对的，我测的几个不同的Vmax是不同底物浓度下的值，按理说Vmax只有一个，应该是一样的。我测定了不同底物浓度下得到了有些许差异的Vmax值，但根据双倒数计算公式，应该用V来计算，可是从酶标仪上得不到V值，所以就不知道该怎么计算Km值了，望高手赐教啊！！！
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89tongzijun[使用道具]
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发表于 2014-1-23 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
公式：Y=X*Km/Vm+1/Km
其中：Y=1/V；X=1/S
要求：在不同的底物浓度[s]下，测定酶的线性反应速率内的反应速率V，以V和S代入上述公式，即可求解得到Vm和Km。
猜测你可能理解错了，你所谓测定的Vmax是指的在某一个底物浓度下反应到最后的产物的浓度，而非反应速度。酶标仪和分光光度计在原理上没有什么区别，都是读OD值的，也就是测定产物浓度[p]或者底物浓度[s]。而反应速率V则需要通过酶的线性反应速率内浓度的变化除以反应时间来计算得到的，单位是OD/sec，OD/min，由于OD正比与产物浓度[p]或者底物浓度[s]，因此也就是mol/sec，mol/min等等。
最后，不知道你测的值是不是在酶反应的线性范围内测定的，如果是，那么除以时间还能得到V。如果是反应结束是的OD值，那就基本没用了吧。
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-1-23 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

米氏方程双倒数作图，直接可以读出Vmax 及Km值，生化书上很清楚。
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