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标题:【求助】PVDF 膜活化

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发表于 2014-1-23 17:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】PVDF 膜活化


我刚学习western blot技术听说PVDF 膜需要活化，可是不知道活化时间怎么掌握，用什么活化效果较好？急却想知道相关的内容！期待知晓者给以答复，在此先谢谢了
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发表于 2014-1-23 17:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

ABCAM 上面说甲醇泡1-2 分钟
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jujuba[使用道具]
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发表于 2014-1-23 17:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

甲醇中泡20秒左右，然后在ddH2O中泡2分钟，然后再转移缓冲液里泡至少10分钟
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发表于 2014-1-23 17:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

想问一下，用PVDF膜的话，它的缓冲液怎么配啊，都是什么啊？谢谢。
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发表于 2014-1-23 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

缓冲液就是转膜缓冲液吧。我是放在甲醇里泡泡，然后就直接放在转膜缓冲液里了。
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发表于 2014-1-23 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢各位，我学到了很多知识，因为最近几次转膜都没有成功，还在找原因当中，我用的半干法转膜，第一用的NC膜很成功，因为师兄只剩了一点NC膜，近来改用PVDF膜都没有成功过，所以求助！我还想请教半干法有什么需要注意的吗？
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发表于 2014-1-23 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
准确的说，应该是去极性，目前市面上有不需要甲醇泡而直接使用的，可以和厂家咨询一下。
我的做法和coven相同，也有的做法是甲醇浸泡1-2秒，可以试试。
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发表于 2014-1-23 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们的做法是甲醇泡20－30分钟，然后用缓冲液泡一会，只要膜沉下去就可以用了，我们也有人就泡几秒钟，倒也能做出来。
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lxh031[使用道具]
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发表于 2014-1-23 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Milipore 的说明书上是这么说的：


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yes4[使用道具]
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发表于 2014-1-23 17:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

甲醇浸泡15秒，单蒸水冲洗4-5遍，然后放在TRANSFER BUFFER里面待用 就好了
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