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标题:【求助】紧急求助180kD蛋白的湿转条件

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发表于 2014-1-24 16:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】紧急求助180kD蛋白的湿转条件


我的目标蛋白是分子量180kD的，请问各位专家我转膜的最佳条件是什么？我目前使用的条件是400mA转100分钟，不过结果不太好，还请各位多多指教，不胜感激！
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发表于 2014-1-24 16:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

大家湿转都用那么大电流啊？400mA转膜液是不是都烫手了？
不知道，我们科传统的是用80mA，我的125KD的3h就转得很好。
科里有人做过250KD多的，80mA转了7-8h。
如果用PVDF膜，据说一般不容易转过，转不过来的可能性大点。
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发表于 2014-1-24 16:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

150mA，2-3h，加冰块降温
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发表于 2014-1-24 16:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有，为什么用湿转，半干转180kd的蛋白完全没有问题的啊
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发表于 2014-1-24 16:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

100V，1.5-2h
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发表于 2014-1-24 16:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我经常转这么大的。300ma。四个小时。没问题。加冰块降温。
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发表于 2014-1-24 16:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

先谢谢大家了，最近的结果稍后发来给大家看看，帮忙再给提点改进意见。
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发表于 2014-1-24 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
他们 经常100MA或者55V转七个小时，还不错
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发表于 2014-1-24 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不要只看电流，对于不同的转移液，同样是400mA，电压却会差别很大。一般对于180Kd的蛋白，如果你选择横流的话，那么你可以选择电压在180V左右的电流，这样转1.5小时足够了。当然条件是可以变的，在这种情况下，你再提高一点电流，就可以相应的减少一点时间。
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发表于 2014-1-24 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做的目的蛋白是130KD，用的是200mA稳流3小时，还行吧。可以参考下。
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