小中大whole Protein extraction buffer:
1 M Tris(pH 7.5) 120 µl
0.5 M EDTA 18 µl
1 M KCl 240 µl
100% glycerol 300 µl
100 mM DTT 30 µl
20XProtease Inhibitors 300 µl
加D.W 4,992 µl
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总量 6 ml
另外再加 1% Triton X-100
1 M NaF 6 µl
100 mM Na3Vo4 60 µl
100 mM PMSF 60 µl
每块儿组织里加500 ul研磨后，在冰上置30分钟（每十分钟vortex一次），4度，14000rpm离心1小时。
以rpm论单位可能不正确，但我们实验室的protocol就是这么写的，我也用过不同的离心机，只要能转到这个速度的离心机用这个速度好像都没问题。
需要特别说明的是，这只是提取总蛋白的方法而不是专门提取膜蛋白的方法，当然总蛋白里含有膜蛋白，但是敏感度可能不是很高，那些微小的变化可能不好检测出来，所以我是想用试剂盒，上面的那些条带只是为了调整western条件才用总蛋白做的。
to dufenglai：
我是用了湿转。
你是不是也做NMDA受体？NMDA受体有几种亚型，亚型1的抗体BD Parmingen公司的（556308）标有120kD，就是我上面条带中的第一个，你的是不是NR1啊？
我觉得其他条件都确定没问题了可以考虑是dye的问题，比如配的时间长了缺少DTT或者betta-Mecaptoethanol挥发了等等，这些部分也挺重要的，是我的体验。
