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终于在这儿找到知音了，这段时间我做了不少的BCA法蛋白浓度测定，总的来说是比较郁闷，在这里总结一下经验，跟各位大侠讨教。
一是试剂盒厂商的操作指南有问题。我用的是国产试剂盒，具体就不说哪个厂家了。按照厂商提供的操作，实验第一、二次均以失败告终。一是相关系数不好，在0.974左右，且按比例稀释的同一样品测出的浓度经计算(乘以稀释倍数)后，变异很大，让人困惑。后来才知道，我的蛋白标准和样品是直接按厂商推荐的体积加到96孔板的，这样就没有经过预先混匀这一步，以致蛋白标准及样品没有充分混匀，所测算出的结果变异相当大。后经改进，先在EP管中按比例将蛋白标准及样品稀释，用涡旋混匀器混匀后，再加样到96孔板，结果有所改善，相关系数R2在0.997左右，勉强可以接受，所以个人觉得jonyerain说的很有道理，EP管中加入的量要大于96孔板中的量，避免吸附致加样量不够。
二是试剂盒的蛋白标准浓度范围狭窄，样品稀释度难以掌握。我所用的试剂盒蛋白标准曲线所对应的浓度为0 25 50 100 200 300 400 500ug/ml，结果在酶标仪上，样品稀释16倍、20倍后仍然不能读数，只有将标准曲线的范围改为2000ug/ml，在标准曲线的延长线上读出样品浓度，说明蛋白样品浓度超出了蛋白标准的浓度；更可恶的是，0,25ug/ml对应的蛋白标准居然也读不出来，所以我超级怀疑是试剂盒的蛋白标准浓度范围及精确度问题极大。
三是操作过程应该注意。我觉得要准确测定蛋白浓度，首先要保证移液器的精度，其次，像jonyerain说的那样，每次用移液器吸样品，要先将枪头在样品中预吸几次，然后在EP管底打出，尽可能减少吸附。
如果条件许可，可用进口的试剂盒，结果会不一样的。
