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在乳酸菌中表达蛋白我没有做过，不过蛋白提取方法应该是一样的，应该是你输入错误吧，1.7ml上清加入300ul100%TCA吧。
我一般做的体系比你大一点，比如9ml培养物，10,000G离心20min，取上清在过0.22um的滤膜，防止污染菌体，后面收集的上清中加入1ml100%TCA，终浓度是10%，4度沉淀4-8h，有时候也过夜，我有看过说-20度沉淀过夜的，我试过，液体冻起来了，感觉效果不是很好，但感觉你沉淀的时间太短了，延长时间看看。沉淀完后10,000G离心30min，小心去掉上清，这时就能看到沉淀，再加入2ml丙酮洗一遍，晾干去除丙酮，再用一定体积的TE溶解（一般浓缩100倍，9ml上清到90ulTE）。
感觉你说的方法不是很完整，可能主要的原因还是沉淀时间太短，沉淀完离心等步骤都有吧，你参考我上面写的方法，把你的方法稍作改进，再来吧，应该能跑出条带的，即使目的蛋白没表达，也会有菌体自身分泌的蛋白的，实验就是这样，反反复复，只要每次条件有点改变，不是简单的重复就好，结果总会出来的。
