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标题:【求助】SDS-PAGE蛋白条带模糊?

JK.jon[使用道具]
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1
 

【求助】SDS-PAGE蛋白条带模糊?


最近跑蛋白胶条带总是很模糊,以为是染色液用久了,就新配了染色液,但是情况依旧没有改观。
弱弱的问一下,大家配的SDS-PAGE缓冲液一般用多久啊?溶液放久了对实验结果有这么大的影响吗?
感觉条带很不清晰,但是又不知道什么原因。请大家帮忙分析一下。


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ALALA[使用道具]
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是不是上样量有点大啊。
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你有没有更换胶的浓度啊?!
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JK.jon[使用道具]
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4
 

分离胶7.5%,浓缩胶5%
我看了好多图,感觉都不是很清楚
我是1ml菌体培养物离心,弃上清,加120ul水和30ul的5x上样BUFFER,沸水煮15分钟。取20-30ul上样。
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5
 
这应该是电泳缓冲液使用时间过长导致的,用的次数多了脏了就会这样,重新新配就可以了,主要是上槽,上槽buffer是通过胶的,一般上槽用过几次就倒到下槽里当下槽buffer使!
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yychen[使用道具]
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6
 
我们的电泳缓冲液一般用三次就换了,用到后来对电泳的速度影响很大,电泳跑的很慢。但我觉得你的图电泳缓冲液是一方面问题,我觉得你的上样buffer是不是有什么问题?你再重新配一遍做做试试吧。我也见过那种情况,最终才发现是上样buffer的问题。
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standup[使用道具]
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我也遇到这种问题,而且所有条带都特别浅,不知什么原因?
电泳缓冲液是新配的,如果是5乘上样缓冲液的问题,那又是为什么呢
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vvmmoy[使用道具]
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1)更不是电泳液的问题,电泳液只会导致电流大小,影响跑胶的速度。即便电泳液很脏,但是那些脏东西能跑进胶里吗?即便跑进去了,能想蛋白一样被染色吗? 好好分析下。 以后再别因为胶不干净来找电泳液的原因
2)貌似胶的浓度是小了点。(不知道楼主所说的模糊,是指包括Marker在内的条带也模糊还是说,样品带上太模糊了)如果样品带太模糊,建议再稍微减少样品用量,煮沸后离心2-3min,吸取样品上清点样。
3)我更坚持的一个观点是,你这个胶照相出问题了,似乎没有对准焦距。如果自己用相继照的,可以再稳当点,锁定好焦距。如果是仪器照相,建议,用一小纸片(带字的)放在你胶的一角,调节焦距,如果能很清晰的看到纸片上的字,再稍微拉大一点点焦距即可(或者把胶的厚度忽略不计,就不用继续拉大)。
有时候,实验结果很容易出,但必须要仔细处理结果才可以!
个人意见。
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9
 
我也遇到这种问题,而且所有条带都特别浅,不知什么原因?
电泳缓冲液是新配的,如果是5乘上样缓冲液的问题,那又是为什么呢

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所有条带特别浅 是你的染色液用此次数到期了
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gogo[使用道具]
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10
 

我也遇到过类似情况,经过试剂重配,条带较为清晰。采取的措施有:
1:在配制分离胶和浓缩胶时,用灭菌蒸馏水,不要用非灭菌蒸馏水。
2:重新配制TRIS-HCL(PH8.8和6.8),PH值一定要精确。
3:1%SDS和1%过硫酸铵,要现配现用,要用灭菌蒸馏水稀释。
4:电泳缓冲液,要现配现用。
祝成功!
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