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你说的上清是指什么?是细菌培养上清吗?还是指细菌裂解后所得的上清?
通常重组蛋白表达部位分下列几种
1)分泌性表达,表达的重组蛋白存在于培养上清或细菌的周质空间。(由于大肠杆菌有很厚的细胞壁,在分泌信号肽的引导下,重组蛋白一般分泌到细胞壁和细胞膜之间的周质空间,无法像真核生物那样分泌到培养上清里面。所以在大肠杆菌分泌性表达又叫周质空间表达。)
2)胞质可溶性表达,表达的重组蛋白存在于细胞质中,用适宜的裂解液裂解宿主微生物后,重组蛋白存在于裂解后的上清中。
3)包涵体表达。表达的重组蛋白也存在于细胞质中,只是由于重组蛋白聚集成不溶性的包涵体团块,所以裂解宿主微生物后,重组蛋白存在于裂解后的沉淀中,需要用强变性剂比如尿素,SDS等才能溶解。
4)膜表面表达,这多见于细胞转导通路和表面展示技术的研究。表达的重组蛋白携带有合适的跨膜结构域,从而使其镶嵌在细胞膜上。
5)核内表达,这多见于酵母双杂交或转录因子的研究。表达的重组蛋白携带有核定位信号,能够引导其进入细胞核发挥功能。
PET32a空载体表达的重组蛋白主要是TRX片段,这个蛋白在通常的诱导条件下,有很大比例以可溶性形式存在于细菌的胞质里。也有部分以包涵体形式存在。