蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】pvdf 干了影不影响效果

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】pvdf 干了影不影响效果

zwsyrt[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79787
精华 0
积分 594
帖子 867
信誉分 100
可用分 5136
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-15
状态 离线
1

发表于 2014-2-5 21:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】pvdf 干了影不影响效果


我用的是PVDF膜，转弯膜之后做封闭，一抗和二抗时，膜需要一直保持湿润吗？做完了ECL发光后的膜怎么保存。还能再用吗？在线等待。谢谢了。
顶部
vvmmoy[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79224
精华 0
积分 825
帖子 1270
信誉分 100
可用分 7255
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-8
状态 离线
2

发表于 2014-2-5 21:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最好不要干了，短期保存可以浸泡在TBST中置于4度（一周内），－20℃可以保存更久。一般一张膜检测3－4个左右的抗体是没问题的。当然，一定要根据你的抗体的质量具体来定，比如：actin可以在杂完5个抗体之后再杂都可以。笔者有一次将一张膜干燥状态下室温放置一周后杂actin居然ok。
顶部
biabiade[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76440
精华 0
积分 388
帖子 435
信誉分 100
可用分 3036
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
3

发表于 2014-2-5 21:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我来告诉你，干或者湿的都可以，转膜后使其干燥后封闭会提高灵敏度，也就是说更多的蛋白会留在膜上。ECL发光时也可以使其干燥，效果不错。
来自millipore 蛋白手册以及其ppt的讲义，我的信号弱时查到的。
顶部
owanaka[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76900
精华 0
积分 395
帖子 510
信誉分 100
可用分 3337
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-10
状态 离线
4

发表于 2014-2-5 21:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不能干，膜和蛋白性质都会受影响的。
楼上两位的做法虽然也的确可以出结果，但是这种结果就比较不可靠了。
这样做出来的DATA估计像样的杂志是不会接受的（当然如果他们知道的话）。
反正我们实验室是绝对避免膜干的，当然反复使用过多也不好。
顶部
biabiade[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76440
精华 0
积分 388
帖子 435
信誉分 100
可用分 3036
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
5

发表于 2014-2-5 21:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不把家底拿出来，没有人信服。


查看积分策略说明
附件
2014-2-5 21:38
40548345.jpg (27.07 KB)
 
顶部
biabiade[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76440
精华 0
积分 388
帖子 435
信誉分 100
可用分 3036
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
6

发表于 2014-2-5 21:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你看看怎么保存知道了吧，呵呵


查看积分策略说明
附件
2014-2-5 21:38
27451568.snap.jpg (68.9 KB)
 
顶部
biabiade[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76440
精华 0
积分 388
帖子 435
信誉分 100
可用分 3036
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
7

发表于 2014-2-5 21:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

wet out是什么意思啊，Remember to wet out membrane before blocking step!
怎么个意思啊，是不是封闭之前要在甲醇中湿润还是在封闭液中湿润啊
顶部
nikun230[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107980
精华 1
积分 258
帖子 231
信誉分 102
可用分 1901
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
8

发表于 2014-2-5 21:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有试剂可以去除一抗二抗，接着再进行WB，不影响后续操作。如果保存的话，最好别干。如果干了，再用时要在甲醇中浸泡
顶部
tie8[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75844
精华 0
积分 442
帖子 543
信誉分 100
可用分 3571
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
9

发表于 2014-2-5 21:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

实验室有人说dry了以后就没有信号了
但是你去看minipore PVDF膜自带的说明书
里面写了一种很变态的western方法, 其中重要的一步就是把膜弄干
但是我没有亲自试过, 仅供参考
顶部
lixi559[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73492
精华 0
积分 560
帖子 820
信誉分 100
可用分 4896
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-23
状态 离线
10

发表于 2014-2-5 21:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们实验室的Western Blot也很忌讳干膜，说干了膜背景会很重，所以每次我都很小心，连裁剪PVDF膜的时候也在PBST中弄。记得有一次重新将PVDF膜孵育抗体时出现了干膜的情况，结果背景很重，可能真的干膜对曝光的背景还是有影响的。
顶部