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标题:【求助】sds page 电泳求助：分离胶凝聚不均匀！

qiangren789[使用道具]
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发表于 2014-2-7 15:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】sds page 电泳求助：分离胶凝聚不均匀！


最近刚开始做原核表达，想纯化蛋白做抗体，但是电泳总是跑不好。在园子里看了很多帖子，怀疑是胶凝的不均匀，但是调整了几天胶还是这样，请有经验的同学给指点指点。多谢！


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qiangren789[使用道具]
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发表于 2014-2-7 15:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

再来一个


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98776langtao[使用道具]
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发表于 2014-2-7 15:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
从你的图上看应该是制胶的问题。检查一下制胶的几种溶液。
建议：1. 过硫酸铵（APS）一定要用新的，避光保存，不要超过一周；
2. 看一下Tris-HCl的pH值是否正确；
3. 30%丙烯酰胺最好过滤一下除去杂质，保存时间不要太久；
4. 电泳缓冲液用新的，确保pH8.3。
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INK[使用道具]
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发表于 2014-2-7 15:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

换AP,减少上样量
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发表于 2014-2-7 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
离子强度是不是太高了？
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发表于 2014-2-7 15:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

pH值要调整好
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发表于 2014-2-7 15:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用10%的分离胶
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abc816[使用道具]
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发表于 2014-2-7 15:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
觉得好像是配胶的时候是不是太慢了，加了催化剂之后胶就开始凝了，如果太慢了不容易均匀的
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lixi559[使用道具]
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发表于 2014-2-7 15:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
根据你的图来看 蛋白表达不高 做抗体效果不会很好的
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发表于 2014-2-7 15:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
跑胶结果还好，但是不要故意把胶搞得那么难看。呵呵
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