【求助】硫酸铵沉淀蛋白电泳

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标题:【求助】硫酸铵沉淀蛋白电泳

biabiade[使用道具]
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发表于 2014-2-8 08:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我想问一下硫酸铵沉淀蛋白之后能不能不除盐浓缩直接SDS-PAGE电泳啊？

cwcwcww[使用道具]
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发表于 2014-2-8 08:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #1 biabiade 的帖子

跑出来的条带会很不好看

taoshengyijiu[使用道具]
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发表于 2014-2-8 09:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

盐离子会影响电泳的带

biabiade[使用道具]
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发表于 2014-2-8 09:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

除了透析和过柱除盐外有没有什么更简便的办法吗？

fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-2-8 09:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

它会影响蛋白质条带的迁移率和带型，盐浓度尽可能低，钾离子必须除去，因为钾离子沉淀SDS，
在你的酶液中加入EDTA，看能不能螯和金属离子

flower-201[使用道具]
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发表于 2014-2-8 09:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

适当稀释（比如你的蛋白用水溶解后再稀释2-3倍），0.1M以下的硫酸铵浓度对电泳影响还是比较小的

喵咪[使用道具]
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发表于 2014-2-8 09:02 资料个人空间短消息加为好友

小中大

透析很麻烦吗？
做实验哪有那么多捷径啊！！！

biabiade[使用道具]
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发表于 2014-2-8 09:02 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由喵咪于 2014-2-8 09:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

透析很麻烦吗？
做实验哪有那么多捷径啊！！！

关键是透析之后浓度降低了，你怎么跑电泳看到你的蛋白条带啊？并且还有相当一部分损耗啊。

DONT[使用道具]
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发表于 2014-2-8 09:02 资料个人空间短消息加为好友

小中大

跑SDS-PAGE除盐是必要的，除盐的方法除了过柱、透析外，还可以考虑用超滤离心管，这种方法损失较少，还可以浓缩。透析损失是肯定的，至于浓度降低，你可以再用PEG浓缩或者冻干的方法浓缩。选那种只能根据自有的条件，权衡利弊选择了。