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标题:【求助】40%丙烯酰胺溶液能用于配置15%的蛋白分离胶吗?

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【求助】40%丙烯酰胺溶液能用于配置15%的蛋白分离胶吗?


请各位帮帮忙!我门实验室前一段时间,跑SDS-PAGE时出了点问题,经过查找原因是30%丙烯酰胺溶液出了毛病,所以我打算买一瓶配好的丙烯酰胺溶液,我打电话给上海生工的技术部,订试剂时他说只有40%丙烯酰胺溶液(29:1丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺),我跟他说我们实验室以前都是用
30%,他告诉我40%的一样能用,说他们公司是按国际标准配的,然后我就定了一瓶,不过前天用了以后,胶根本跑不开,不过这次可能是我配胶有点问题,40%的我按照原来30%的用量,但是昨天我把40%的在用时稀释成30%用量不变,不过跑出来胶还是有点问题:1.跑胶过程中拖尾很严重;2.跑胶时间很长,我160V跑了2个小时左右,而且胶感觉比原来脆。我打电话问生工的技术,他们态度很是不好,老是找我别的原因,要么说***作不规范,而且根本不听我把话说完,也不听我跑胶时出现了什么问题,很是气愤!请各位帮帮忙,找找原因,40%的丙烯酰胺溶液能不能用于配蛋白电泳胶?非常感谢!
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gogo[使用道具]
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国际惯例,哈哈,这个解释很可笑。 但也没错,我们实验室买来的现成的也是 40% 。
仅仅听楼主的述说,好像也找不出什么原因,既不能肯定他们的产品没问题,也不能排除楼主的操作没问题。虽然胶的质量很重要,但是毕竟蛋白质电泳并不仅仅决定于胶。
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谢谢你先!你们实验室也是用的40%的,能说一下你们配方吗?谢谢。gingivalis说的对,其实我也不敢肯定是产品问题,因为以前我们都是自己配的30%的,从来没买过,也没用过40%的,我怀疑是40%的用法不对,才给他们公司的技术部打电话问一下的,谁知道他们态度那么不好,话都不听我讲完。不过前几天配胶的时候,我是从我们隔壁实验室借用的30%(他们自己配的)其他的溶液也都是我们实验室的,跑电泳时候就没有出现我上面说的问题,胶跑出来也还可以的,也没出现上样样品在跑电泳过程中托的那么厉害,我今天跑也还是用的40%,还是出现一样的问题,我刚刚估测了一下,托的都足有2厘米长。对了,***作应该没问题的,因为我跑过好多次电泳了,都没什么问题的。谢了!
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fqswdzd[使用道具]
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既然楼主对照了隔壁实验室的丙烯酰胺,那么楼主就可以自己判断到底哪儿出了问题了。
我们实验室的配方我一时找不到,反正跟《分子克隆实验指南》 没什么区别。
另外,40% 按比例做成 12% 的胶应该很容易,如果楼主嫌计算麻烦,可以先把 40% 的丙烯酰胺用 MilliQ water 稀释到 30% ,然后就按照你们以前使用 30% 丙烯酰胺时的操作来。
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用双蒸无菌水稀释到30%应该可以吧
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greenbee[使用道具]
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用你能搞得到的最纯的水。
每次用多少 稀释多少。
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!我昨天跟今天配胶时,跟你说得方法一样,就是把40%的稀释成30%的才用的。我打算明天再配胶时,再去用一下隔壁的配一块,再用我们买的配一块看看。例外,我今天把电泳缓冲液也重新配了一下,明天再看看了。
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对了,我稀释用的是我们平常配永液用得去离子水,影响应该不大吧?
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panda王[使用道具]
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用过,也能跑,按照12%配方配,分离效果如15%。
有一个问题出现,15KD的大概跑到胶的2/3就跑不动了,不知道为什么。
如果只是看看结果,应该用的还是不错的。
PS:传一个图上去,用40%丙烯酰胺溶液跑的
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panda王[使用道具]
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