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标题:【求助】难道是烧胶？还是？

nikonun[使用道具]
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发表于 2014-2-10 15:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】难道是烧胶？还是？



紧急求助：
各位大虾，本人初学WB。跑的电泳前几天好像还好，今天两次都是像烧胶一样中间凸凹不平，跑电泳前是凝好好的。 而且，电压100v电流却只有10mA左右，检查几遍都没发现问题，应该是通路啊。
另外，我的电泳液配方是
Tris 3g
Glycine 18.8g
SDS 10g
去离子水定容至1000ml. 因为是参照分子克隆的配方，看到园子里同行的配方Glycine 是14.4g，考虑是不是我的Glycine 过多。且，测得PH值大概在8.0左右。（但前几次用的也是这个配方，没出现这种结果啊）会不会是蛋白浓度过高呢？煮后发现有的蛋白凝成块状，像煮熟的蛋清。
郁闷等待中，希望不赐吝教！
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duoduo[使用道具]
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发表于 2014-2-10 15:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
应该是电泳仪的问题，可能是电路障碍导致散热问题。
另外电泳液甘氨酸一般用14.4，但这不会导致上面问题的出现
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nikonun[使用道具]
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发表于 2014-2-10 15:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

哦，我在打电话问问厂家吧。
是啊，今天跑了两次，四块胶都是那样 中间像烧胶一样坑坑洼洼的，四周还好的
前天还好的。今天换了蛋白了，所以我怀疑蛋白的问题。
可是电流小却是一直的问题！
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nikonun[使用道具]
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发表于 2014-2-10 15:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

自己顶！！
还有就是电流非常小，100v是和60v差不多都在10mA左右 不知是什么问题？
谁能帮帮我啊！
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-2-10 15:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

整个换掉，你要一个一个排查，毕业时间都过了
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nikonun[使用道具]
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发表于 2014-2-10 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

整个换掉，你要一个一个排查，毕业时间都过了


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发表于 2014-2-10 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

照片翻了180度，呵呵
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ero11[使用道具]
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发表于 2014-2-10 15:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的胶是不是没有充分混合均匀？加了TEMED后要马上混合均匀，要不然也会导致胶凝得不均匀！
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nikonun[使用道具]
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发表于 2014-2-10 15:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #8 ero11 的帖子

不会啊，我加完后立刻混匀灌胶了啊。
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yonger[使用道具]
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发表于 2014-2-10 15:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得最好的方法是找一个高手看你做一遍。
我就发现这里的学生跟我说严格按照我给他的步骤提取DNA，但是怎么都提不好，后来我亲自看他做，发现他有很多实验细节是错的。最后我发现了他为什么提不好DNA的原因。就是一个细节没做好。
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