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标题:【求助】如何以氨基酸序列克隆基因序列

尘朵朵[使用道具]
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发表于 2014-2-10 21:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】如何以氨基酸序列克隆基因序列


各位老师，我是新手，想请教如下问题：
分离到一个未知蛋白，并进行了N端氨基酸测序，我想将它的编码基因序列克隆出来，但不知道该这么做？
请老师们给我指明道路（越详细越好）
不胜感激！
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nn255[使用道具]
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发表于 2014-2-10 21:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用你的N端序列做Blast，先确定是什么蛋白，然后找相应的基因
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尘朵朵[使用道具]
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发表于 2014-2-10 21:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可是如果检索不到同源性很高的蛋白，我该怎么办呢？
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shanzhapia696[使用道具]
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发表于 2014-2-10 21:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

斑竹，我找了5个小时。一点也不夸张。结果都没没有具体的说明。
奔跑的大约克，不知道你到底怎么做了。能不能告诉我一下啊。我也在做类似的。现在还是一头雾水。
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shanzhapia696[使用道具]
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发表于 2014-2-10 21:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我那个也是没有同源性的，现在测了N段序列和一些肽段的序列。不知道继续怎么做比较好了。请高手指点啊！！
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jiushikeshui371[使用道具]
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发表于 2014-2-10 21:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果没有同源序列，可以通过RACE-PCR的方法，通过已知N端测序，设计兼并引物做上游引物，通过3‘RACE 的锚定引物做下游引物可以p出3’ 端全长，在用5‘RACE p出5’ 端全长。这种方法是目前较常用的以氨基酸序列逆推出基因全长序列的方法，时间周期较短，就是费用较高。
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shanzhapia696[使用道具]
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发表于 2014-2-10 21:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看来我还是没找对地方，呵呵。
觉得你说得很有道理，我准备按你的思路做。以后有问题希望你能帮助我。
谢谢。
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