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标题:【求助】向SDS-PAGE高手请教

8princess8[使用道具]
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发表于 2014-2-12 19:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】向SDS-PAGE高手请教


分离胶是12.5%,浓缩胶是4%,恒流5mA预电泳一小时，之后电流分别为15mA,25mA,所有的条件都是和我师姐的一样,做了N块胶了,每块胶大电泳大概都是4小时，而且染完色后，下部的条带不清晰；而我师姐的电泳一般都是2小时，最慢不超过2.5小时，而且下部的条带清晰。
请问各位的大侠是什么原因导致我的电泳时间过长和下部条带不清晰！
谢谢！！
这张是我做的!


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2014-2-12 19:48
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8princess8[使用道具]
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发表于 2014-2-12 19:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这张是师姐做的!


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68943512yao[使用道具]
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发表于 2014-2-12 19:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 8princess8 于 2014-2-12 19:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
这张是师姐做的!

如果你说条件一样,我猜想你的样品量加的没有你师姐多.
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ritou1985[使用道具]
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发表于 2014-2-12 19:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

running buffer
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lxh031[使用道具]
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发表于 2014-2-12 19:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白质条带的清晰与否取决于所使用的SDS的级别及品牌。
这是《蛋白质技术手册》汪家政版87页中所述。
如果你用的是和你师姐同一的Loading buffer的话，我个人认为是你胶的问题。所用试剂是否放置时间过长？
重点检查一下配胶所用的SDS。
另：电泳时 running buffer 要预冷，以防产热过多。
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发表于 2014-2-12 19:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的running buffer 是新配的吗，如果不是的话我建议你重新配一下
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yapuyapu[使用道具]
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发表于 2014-2-12 19:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得应该是电极液放的太久,电阻太大,所以我建议用新配制电极液试一试!或者加大电压
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8princess8[使用道具]
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发表于 2014-2-12 19:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

首先谢谢各位大侠的指点!
电极缓冲液我配过很多次,但新配的也是4小时左右,跑完也是不清晰。上样量和我师姐的一样。Tris-Hcl是配完之后放在4度冰箱里的，我也新配过，但情况也是不没有好转。
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8princess8[使用道具]
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发表于 2014-2-12 19:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

刚才去查了一下SDS,我跟师姐用的SDS是同一厂家出的,应该不是这个原因,能是什么原因呢?
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jkobn[使用道具]
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发表于 2014-2-12 19:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

胶的染色及脱色也很重要，楼主的胶跑得还是不错的，像是脱色的问题，背景不够清晰。
用新配的染色液试试，要一次性染够（可适当加热，微波炉中就行），脱色液的脱色能力要较好，脱色过程中稍稍勤换脱色液，至条带清楚、背景清晰为止。
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