蛋白质与蛋白组学

我觉得你的温度可以在低一点.
或者,你需要考察一下这个蛋白折叠的时候,有没有分子伴侣等等

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我觉得不能用大肠杆菌不大，即使表达出来是可溶，没有活性的可能性也挺大

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我觉得上面的两种可能是有的。
建议：改造改造过的南极油螺旋菌属(Oleispira) ，4－12°C低温表达减少包涵体
是否可以考虑利用Stratagene公司的 ArcticExpress感受态细胞解决，表达分离于南极Oleispira antarctica的分子伴侣（cpn60, cpn10）有助于折叠减少inclusion bodies的量：”Chaperonins are known to facilitate proper protein folding by binding to and stabilizing unfolded or partially folded proteins. Chaperonins Cpn60 and Cpn10 show high protein refolding activities at temperatures of 4-12°C. When expressed in our ArcticExpress competent cells, these chaperonins enhance the cells' ability to grow at lower temperatures and properly process recombinant proteins, thus increasing the amount of available soluble protein (Figure 2).“
cuturl('http://www.stratagene.com/products/displayProduct.aspx?pid=796')

我最近也是在做膜蛋白的表达，刚刚完成其中一个，且疏水性>亲水性，二级结构显示很少螺旋，没有问题，可溶性表达量很大，且已经纯化，结果很好。你的表达菌 诱导后菌体密度也差不多(OD600在3.8--4.1之间)，肯定是包涵体了，那么大的OD。所以请你详细说明一下，你的诱导过程。

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我用的SOC培养基 不诱导的话OD很容易达到5.0以上的
我的膜蛋白有6个跨膜片断 疏水性很强
和MBP融合表达本来是为了减少疏水性 减少毒性
结果毒性是降低了 疏水性似乎没什么变化

我觉得上面的两种可能是有的。
建议：改造改造过的南极油螺旋菌属(Oleispira) ，4－12°C低温表达减少包涵体
是否可以考虑利用Stratagene公司的 ArcticExpress感受态细胞解决，表达分离于南极Oleispira antarctica的分子伴侣（cpn60, cpn10）有助于折叠减少inclusion bodies的量：”Chaperonins are known to facilitate proper protein folding by binding to and stabilizing unfolded or partially folded proteins. Chaperonins Cpn60 and Cpn10 show high protein refolding activities at temperatures of 4-12°C. When expressed in our ArcticExpress competent cells, these chaperonins enhance the cells' ability to grow at lower temperatures and properly process recombinant proteins, thus increasing the amount of available soluble protein (Figure 2).“
cuturl('http://www.stratagene.com/products/displayProduct.aspx?pid=796')

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good idea 谢谢
不过估计老板不会让我买菌种的了
lz有该菌株否? 可以交换

我用的SOC培养基 不诱导的话OD很容易达到5.0以上的
我的膜蛋白有6个跨膜片断 疏水性很强
和MBP融合表达本来是为了减少疏水性 减少毒性
结果毒性是降低了 疏水性似乎没什么变化

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控制OD太容易了吧？这个很重要，我最近纯化的那个蛋白,低OD比高OD可溶性表达量大的多的多，另外一个蛋白37度比低温表达量高，虽然表达量也不是很大。