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标题:【求助】做western是浓缩胶不凝

12xunmei[使用道具]
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发表于 2014-2-13 15:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】做western是浓缩胶不凝


大家好，最近的实验要求做ＷＥＳＴＥＲＮ，第一次做的还好，可是，因为丙烯酰胺用完了，我们重新配好后，胶总是不凝，
其中分离胶凝的比较好，配的是１２％的，浓缩胶５％的，就是不凝，不知道怎么回事，希望大家帮忙．
我浓缩胶配方如下：
其中ＡＰ用了５０ＵＬ，本来要求是３０的，ＴＥＭＥＤ本来要求３ＵＬ，我用可６ＵＬ，可是浓缩胶还是不凝，
请大家帮忙了
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-2-13 16:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

浓缩胶和分离胶用的成分基本一样，只是比例不同。既然分离胶凝得比较好，那就应该是两种不一样的东西出了问题-----PH6.8的tris缓冲液，时间长了Ph可能会改变，试着看一下
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wood533[使用道具]
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发表于 2014-2-13 16:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

AP试剂时间长吗？尽量用下层粉末，尽量避免AP粉末氧化，并且现用现配最好，超过10天地就重配吧。试试看！
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Ao7[使用道具]
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发表于 2014-2-13 16:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
的观点很正确，如果是试剂有问题的话，你的分离胶不可能凝的好，所以试试PH值。 也可以试试更换APS。
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ii077345[使用道具]
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发表于 2014-2-13 16:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我上次也出现类似的问题。浓缩胶不凝，我重新配了AP，就好了，你试一下吧
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12xunmei[使用道具]
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发表于 2014-2-13 16:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢各位了；我现在正在试验各种方法，可是依然没有成功，该换的也都换过了．太郁闷了．．．
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3648755[使用道具]
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发表于 2014-2-13 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
能否试着把AP浓度调大点？它是促凝剂，还有，最好现用现配，很容易变质的。
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vcve[使用道具]
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发表于 2014-2-13 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你只换一种试剂就不凝了，在其他条件都一样的话 肯定是炳稀酰胺出问题了
丙烯酰胺没有充分溶解即浓度不准确 要加温使其充分溶解
ap和tmemd记得把量适当加大2-3倍。
还有tris的ph 6.8的 值是否变化了啊
再者一定有充足的耐心等上20分钟左右~
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am10[使用道具]
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发表于 2014-2-13 16:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

AP喝TEMED现配吧，我也出现过这种问题，现配的AP喝TEMED很好用。
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ritou1985[使用道具]
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发表于 2014-2-13 16:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 am10 于 2014-2-13 16:05 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

AP喝TEMED现配吧，我也出现过这种问题，现配的AP喝TEMED很好用。

同意楼上的，另外温度越低越凝的快。
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