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标题:【求助】昆虫系统 感染明显 蛋白却没表达

chuntian1983[使用道具]
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发表于 2014-2-14 10:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】昆虫系统 感染明显 蛋白却没表达


相关疾病：
感染
昆虫杆状病毒系统 中期感染现象明显 蛋白却没表达 求助求助啊！！
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#甜#[使用道具]
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发表于 2014-2-14 10:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我现在就在做这个
表达的很好
可以具体点不？
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chuntian1983[使用道具]
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发表于 2014-2-14 10:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

相关疾病：
感染
谢谢，嘻嘻，是这样的
抽得Bacmid,然后去转染细胞，收获病毒。再用病毒感染细胞，感染两天后，就看到了细胞被感染的症状，比如细胞变圆，变大；然后裂解细胞，做western验证的时候，却未检测到任何蛋白条带。您说是为啥呀？
备注：这个蛋白之前是在这个系统表达出来过的，后来对序列调整了一下，重新克隆，就一直未成功表达了
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xue258[使用道具]
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发表于 2014-2-14 10:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
相关疾病：
病毒感染感染
你可以做一个小实验
用你的细胞（一定细胞数量），加病毒感染，2-4d收集细胞（1d收一点），然后坐western -blot检测，这样可以确定感染几天细胞有表达目的蛋白。
你要做病毒滴度的，确定好病毒滴度后再加病毒，一般MOI=2-10，我坐的时候MOI=10。
加病毒后细胞数量基本不会增加，还有可能下降（细胞破碎），要确定这些因素：
1、MOI
2、感染天数
3、在那个细胞数量情况下感染几天细胞有表达
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chuntian1983[使用道具]
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发表于 2014-2-14 10:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
相关疾病：
感染
好的，谢谢您！
您的意思是不是说，可能是因为实际发挥感染作用的病毒量不够，或者细胞数目少，而导致的蛋白表达量太少，从而检测不到。
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