【求助】转膜时电流超高

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标题:【求助】转膜时电流超高

bs4665[使用道具]
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发表于 2014-2-15 09:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

昨日在冰浴的环境中进行转膜，电压110V，电流不知道为什么一直都在0.62mA~0.72mA，请问如何才能降低电流呢，调低电压？还是用现配转移缓冲液（转移液用了三次了）？

H2O[使用道具]
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发表于 2014-2-15 09:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

电转液可以用来吸收转膜过程中产生大量的热。在电转化过程中,处于直流电作用的电转缓冲液在电极周围发生电解,由于电转缓冲液成分复杂,电解产生许多离子，会破坏电转体系的稳定。
你的电转液出现电流变大，我觉得可能是这麽几方面原因：
1 你可以查一下ph值，一般电转液的ph值在8.3左右，要求不低于8。
2.你的胶和膜是不是一般大？胶要大于膜，你的三明治结构是不是标准？
3.就是你说的电转液重复使用了3次，有时候重复使用几次没有问题，但是如果转膜液里的甲醇在转膜过程中挥发太多，可能影响你的转膜体系整体的稳定，建议你新配一次转膜液试试。
暂时想到的就是这麽多了。祝你好运！

junjie05[使用道具]
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发表于 2014-2-15 09:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你能不能把你用的转移缓冲液配方写一下看看有没有问题，缓冲液还是现配的最好，另外缓冲液最好在转膜之前就冰浴一阵子，电泳槽内外温度还是有些差别的。

gogo[使用道具]
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发表于 2014-2-15 09:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

两边滤纸如果不小心粘到电流会很大的

bs4665[使用道具]
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发表于 2014-2-15 10:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

转膜时我有特别注意滤纸和凝胶的尺寸，凝胶的体积大于上下两边滤纸的体积，就是为了防止出现短路的情况，谢谢lichander的提醒。转移缓冲液的配方应该没错，都是按实验室的配方单来配置的，我也是先配好10*的转移液，使用时再取100ml10*，加上200ml甲醇，用蒸馏水定容至1000ml。每次转膜前倒是没特别注意转移液的pH值，下次用试纸条测一下。
谢谢各位站友的建议。。。

bs4665[使用道具]
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发表于 2014-2-15 10:07 资料个人空间短消息加为好友

小中大

补充问一下转膜时电流能控制在多少的范围内是最佳状态呢

tangxin_80[使用道具]
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发表于 2014-2-15 10:07 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这个应该根据你转的蛋白大小不同而有调整吧

bs4665[使用道具]
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