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标题:【求助】帮看看2-D考染图

tuomu45[使用道具]
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发表于 2014-2-15 11:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】帮看看2-D考染图


跑的是肌肉总蛋白，用的是11厘米的胶条，上样量为500微克，感觉分子量大的和比较小的蛋白很少，点也不是太多，麻烦各位帮分析一下！！谢谢


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2014-2-15 11:19
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BOSS2011[使用道具]
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发表于 2014-2-15 11:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也做过肌肉组织的2D，结果显示的也是蛋白点比较少，蛋白量多集中在几个大的蛋白点上，甚至相互之间连成片！在肌肉组织当中，一些蛋白的量好像远远高于其他种类蛋白（如actin），我觉得如果可以的话可以将这些蛋白去除（如果这些蛋白不在你的目的范围内）。另外可以选择精度更高的显色方法！
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tuomu45[使用道具]
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发表于 2014-2-15 11:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是的，肌肉组织中是有很多高丰度的蛋白，也曾考虑过去除这些，但没见过类似的文献，不知如何下手。
楼上的，能不能留个联系方式，以后想就这方面多请教您！
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BOSS2011[使用道具]
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发表于 2014-2-15 11:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

当时我们没有做这步，问过一个师兄，但后来该实验没有继续参加，所以具体的做法不清楚！但是以前好像在蛋白版看到过相关的帖子！很久之前了！你找找！好像有试剂盒！
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ii077345[使用道具]
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发表于 2014-2-15 11:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 tuomu45 于 2014-2-15 11:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

跑的是肌肉总蛋白，用的是11厘米的胶条，上样量为500微克，感觉分子量大的和比较小的蛋白很少，点也不是太多，麻烦各位帮分析一下！！谢谢

1、11cm的胶条，做考染上样量500小了一点，而且从你的图谱来看，量也确实小了 点,可以考虑增大上样量到1mg左右。
2、不知道你用的考染方法如何，可以考虑用灵敏度高一些的胶体考染法，或者先做银染分析，找出差异蛋白质，然后再考染鉴定。银染的灵敏度要比考染高很多。
新手第一次发贴，不知道是否对您有帮助。
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hold住[使用道具]
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发表于 2014-2-15 11:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 ii077345 于 2014-2-15 11:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


1、11cm的胶条，做考染上样量500小了一点，而且从你的图谱来看，量也确实小了 点,可以考虑增大上样量到1mg左右。
2、不知道你用的考染方法如何，可以考虑用灵敏度高一些的胶体考染法，或者先做银染分析，找出差异蛋白质，然后再 ...

GE的《双向电泳原理和方法》里面45页有推荐的上样量：
考染，11cm，
PH3－10，只有50－100ug
PH6－11等，100－600ug
50－100ug这个量我觉得满少的，但是楼主的500ug我觉得也不少了，当然也有可能那些高丰度蛋白占的比重比较大
不知道大家在跑24cm考染一般上样量多少？
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daod[使用道具]
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发表于 2014-2-15 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 tuomu45 于 2014-2-15 11:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

是的，肌肉组织中是有很多高丰度的蛋白，也曾考虑过去除这些，但没见过类似的文献，不知如何下手。
楼上的，能不能留个联系方式，以后想就这方面多请教您！ ...

个人提两个建议，不知道是否可行
1.能不能用这一个或几个高丰度都的抗体制备亲和层析柱，这样高丰度的蛋白可以通过柱子去掉一部分，也就是富集了其它蛋白。
2.将高丰度蛋白的等电点算出，选用不在此等电点的胶条跑，这样会将大部分的高丰度蛋白泵出条子：）
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