蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】实验走投无路,再次向各位请教,蛋白质组

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:【求助】实验走投无路,再次向各位请教,蛋白质组

vtongli[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107987
精华 1
积分 283
帖子 221
信誉分 102
可用分 1926
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
1
 

【求助】实验走投无路,再次向各位请教,蛋白质组

今天跑的胶。17cm,PH4-7,上样量300ug,一向顺利升压,二向也没有问题。染色出来发现点是反着的,上方白色的很明显是我需要的蛋白质,但是却是白色的。其他地方一码黑。不清楚是怎么回事,希望指点。不甚感谢。我再把我跑的好的一张用来做对比,一并发上来。


查看积分策略说明
附件
2014-2-15 22:23
98967367.jpg (83.44 KB)
 
顶部
vtongli[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107987
精华 1
积分 283
帖子 221
信誉分 102
可用分 1926
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
2
 

前几天跑的一个,同样的问题,换了1X电泳液,仍然没有解决问题。


查看积分策略说明
附件
2014-2-15 22:23
97177981.jpg (22.52 KB)
 
顶部
vtongli[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107987
精华 1
积分 283
帖子 221
信誉分 102
可用分 1926
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
3
 

这个是以前跑的好的一个图,拿来给大家对比一下。


查看积分策略说明
附件
2014-2-15 22:23
78842436.jpg (22.05 KB)
 
顶部
vtongli[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107987
精华 1
积分 283
帖子 221
信誉分 102
可用分 1926
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
4
 
你的胶似乎是银染的, 精子蛋白一类的生殖细胞的蛋白质提取物。 你的图像形成负染一样的原因我猜测有以下的原因:
1. 首先是水, 银染的水非常重要, 和你的电极缓冲液关系不大, 背景脏的话你的DDH2O还是去离子水肯定污染了(或者是染色盆)
2. 出现反色的原因之二是显色过度, 可能在显色后会发黄, 扫描之后就显得好像是反白了一样。 xia0h战友的那张正常胶的几个大点也都有这种现象。”
----------------------------------------------------
这次我用的仍然是新鲜打回来的去离子水。
给成都的一个技术员打了一个电话,和这个战友的第二点很相同。说是我染色过度导致的。但是我一直是守在那里的,5分钟之内根本不出点。5分钟之后,慢慢出来如上图。我实在困惑的很了。希望大家能帮忙找找原因。多谢各位了。
今天那个技术员说,白色的地方蛋白太多,银离子附着在上面的太多,所以会变成银白色。但是我觉得好歹能显出来颜色吧。银离子多,显色的时候还是得出些点啊。困惑的很!!!!!
顶部
quiqui008[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103466
精华 1
积分 310
帖子 295
信誉分 102
可用分 2271
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
5
 


QUOTE:
原帖由 vtongli 于 2014-2-15 22:23 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
你的胶似乎是银染的, 精子蛋白一类的生殖细胞的蛋白质提取物。 你的图像形成负染一样的原因我猜测有以下的原因:
1. 首先是水, 银染的水非常重要, 和你的电极缓冲液关系不大, 背景脏的话你的DDH2O还是去离子水肯定污染了(或 ...

换新的甲醛
顶部
yyaxw84[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114481
精华 0
积分 307
帖子 334
信誉分 100
可用分 2444
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
6
 

非要用银染吗,如果你的样品是足够的可以试一下考染啊
顶部
wiwi[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 72948
精华 0
积分 466
帖子 612
信誉分 100
可用分 3861
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
7
 

为什么不用考马斯亮蓝呢,我做蛋白分析时基本上摇床染2个小时再用醋酸洗涤就好了,脱色液不用甲醇也很好呢
顶部
@STAR@[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74483
精华 0
积分 464
帖子 506
信誉分 101
可用分 3456
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-11
状态 离线
8
 


QUOTE:
原帖由 vtongli 于 2014-2-15 22:23 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
你的胶似乎是银染的, 精子蛋白一类的生殖细胞的蛋白质提取物。 你的图像形成负染一样的原因我猜测有以下的原因:
1. 首先是水, 银染的水非常重要, 和你的电极缓冲液关系不大, 背景脏的话你的DDH2O还是去离子水肯定污染了(或 ...

说实话,个人认为实验室里净水仪器出来的去离子水,其水质难以符合银染要求。告诉你一种较好的鉴定水质的方法,用一点点硝酸银,几个颗粒就够了,加入一点你用的去离子水,如溶液是淡淡的红褐色,说明水质可以。如果是乳白色,你的去离子水肯定是不符合银染要求的。还有,显色出点的时间一般只要2-3min就可以了,超过5min,肯定你在前面染色的过程中有问题。以上纯属个人看法,仅供参考!
顶部
vtongli[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107987
精华 1
积分 283
帖子 221
信誉分 102
可用分 1926
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
9
 
我来说一下给大家听,以便能让这个帖子圆满结束。
后来我换的1X缓冲液和琼脂糖,结果问题出在琼脂糖这里。才出来的反相。现在问题已经解决了,希望以后的战友不要犯这种错误,配的时间过久的琼脂糖,最好自己重新配新的。
顶部
pou[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 72980
精华 0
积分 408
帖子 496
信誉分 100
可用分 3311
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
10
 

1.上样量减少一些。300ug看似不多,怀疑你的定量不准
2.显色前要水洗2分钟,显色时出现黄色不要立即倒掉,等染色液比较黄了再倒掉,换上新的染色液。
3.甲醛要新的。看看瓶子里有没有混浊的东西,有的话就不能用了。染色液每升加400ul的甲醛比较好
顶部