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标题:【求助】如何浓缩蛋白?

ns5fan[使用道具]
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【求助】如何浓缩蛋白?

我获得的目的蛋白想免疫小鼠,但蛋白浓度太低,想浓缩一下,我用透析袋浓缩了一下,但是效果不理想,请哪位有经验者给指点一下,还有什么其他的浓缩蛋白的方法吗?
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wu11998866[使用道具]
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可以买millipore的超滤管浓缩,或是冰冻干燥机冻干,对样品都不会有害。
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ns5fan[使用道具]
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millipore超滤管贵吗?不知道导师给买吗?这个超滤管具体怎么用,说明书上都有吧,不需要其他的仪器了吧,谢谢
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lixi559[使用道具]
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不是很贵,浓缩的话买YM-3就好了,需要离心机
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wiwi[使用道具]
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我好像也要浓缩蛋白,好像可以用电泳的方法
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小螺号[使用道具]
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浓缩的方法是很多的啊:
1、millipore(经常容易坏,建议一次性如果条件许可,需要高速离心机)
2、amicon(需要液氮灌)
3、冻干后溶解(需要冻干机和液氮罐)
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最好用3~10倍体积的预冷丙酮于零下20度放置30分钟,然后于4度12000转离心收集沉淀,然后自然干燥即可得蛋白粉,用适量溶解液溶解即可
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lorri[使用道具]
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我后来透析蛋白后,是用PEG20000浓缩的,注射兔子已经获得效价
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蛋白浓缩方法基本有:
丙酮沉淀法;免疫沉淀法;三氯醋酸沉淀法;硫酸铵沉淀法;(低温)有机溶剂沉淀法;聚乙二醇沉淀法;超滤法;透析法;离子交换层析和冷冻干燥法……
1,丙酮沉淀法;三氯醋酸沉淀法试验要求的仪器简单,但是常常导致蛋白质变性。
2,免疫沉淀法:得有特异性抗体
3,硫酸铵沉淀法:利用高浓度盐将蛋白质析出(盐析)
选择硫酸按是因为:盐析有效性,pH范围广,溶解度高,溶液散热少,经济,大多数的蛋白都可以用资格方法
4,(低温)有机溶剂沉淀法:强调低温(0-4度以下)是因为10度时蛋白会在有机溶剂中变性,可用乙醇,丙酮……注意:Mg2+离子,pH值
5,聚乙二醇沉淀法:使用PEG时旨在个别情况下才会是蛋白质稍有变性!他溶解是散热低,形成沉淀的平衡时间短,通常达到30%时蛋白质就会达到最大量的沉淀!
6,超滤法:主要针对小体积蛋白质溶液(几ml)此法不易引起变性,不过得有浓缩器,不是哪个实验室都有的
7,透析法:主要用于更换蛋白质的缓冲液,得有透析袋。不需要特殊的仪器 。一般用的是PEG20000进行实验,简单,快速,对蛋白没什么影响
8,离子交换层析:可用阴离子交换树脂进行浓缩
9,冷冻干燥法:在冷冻状态下让样品中的液体升华 ,需要冷冻干燥机,该方法对蛋白活性保存最好。纯物理方法
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