蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】关于tricine-sds-page

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 26  1/3 123››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】关于tricine-sds-page

join[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72960
精华 0
积分 627
帖子 873
信誉分 100
可用分 5266
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
1

发表于 2014-2-20 21:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】关于tricine-sds-page


最近跑tricine-sds-page，怎么浓缩胶不压缩，以前不用tricine用gly 是可以的啊，不知道是怎么回事？还有 一般梳子下缘距夹层胶多大距离啊？
顶部
chuntian1983[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76393
精华 0
积分 421
帖子 522
信誉分 100
可用分 3423
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-4
状态 离线
2

发表于 2014-2-20 21:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #1 join 的帖子

ph值对不对？
差不多1cm
顶部
join[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72960
精华 0
积分 627
帖子 873
信誉分 100
可用分 5266
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
3

发表于 2014-2-20 21:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 chuntian1983 于 2014-2-20 21:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
ph值对不对？
差不多1cm

你好，请问你是指什么的pH啊？
顶部
chuntian1983[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76393
精华 0
积分 421
帖子 522
信誉分 100
可用分 3423
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-4
状态 离线
4

发表于 2014-2-20 21:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 join 于 2014-2-20 21:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


你好，请问你是指什么的pH啊？

浓缩胶的PH值
顶部
join[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72960
精华 0
积分 627
帖子 873
信誉分 100
可用分 5266
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
5

发表于 2014-2-20 21:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 chuntian1983 于 2014-2-20 21:45 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


浓缩胶的PH值

不是8.45吗？还有我的阴极缓冲液怎么是8.5左右？不是8.25吗？
顶部
jingling845[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103462
精华 0
积分 330
帖子 380
信誉分 100
可用分 2671
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
6

发表于 2014-2-20 21:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

能具体说一下你的不压缩的情况吗？Tricine胶能够很好的压缩和分离小分子量的多肽或蛋白，大分子量的则不是太好，这和Tricine的性质有关，它的解离系数更低，能带更多的负电荷，比glycine跑的快，所以能将跑的较快的小分子压缩在一起而跑的比Tricien慢的大分子就得不到压缩，分离效果就会很差！
顶部
join[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72960
精华 0
积分 627
帖子 873
信誉分 100
可用分 5266
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
7

发表于 2014-2-20 21:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 jingling845 于 2014-2-20 21:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

能具体说一下你的不压缩的情况吗？Tricine胶能够很好的压缩和分离小分子量的多肽或蛋白，大分子量的则不是太好，这和Tricine的性质有关，它的解离系数更低，能带更多的负电荷，比glycine跑的快，所以能将跑的较快的小分子压缩在一 ...

既然凝胶缓冲液是一个pH，他的原理就和GLY系统不一样了？如果能压缩，那他是怎么分离的呢？你有没有相关的资料？谢谢
顶部
jingling845[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103462
精华 0
积分 330
帖子 380
信誉分 100
可用分 2671
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
8

发表于 2014-2-20 21:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 join 于 2014-2-20 21:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


既然凝胶缓冲液是一个pH，他的原理就和GLY系统不一样了？如果能压缩，那他是怎么分离的呢？你有没有相关的资料？谢谢

看你的图好像是扩散了，你的电流是多少？
给你讲下详细的原理吧：
先介绍glycine的，电泳压缩是将蛋白压缩在迁移区域中，也就前导离子和后随离子之间，glycine就是后随离子，压缩胶的pH是6.8，glycine的等电点是5.97，此时带的负电荷很少，迁移的也就很慢，比蛋白的迁移还慢就可以把蛋白压缩在很窄的区域内，分离胶时解离增大，核电增多，迁移变快，超越蛋白紧跟在Cl离子后，蛋白根据分子大小得到分离；
Tricine是Tris和glycine的衍生物，兼有两者的性质，pKa1：2.3，pKa2：8.15，可以粗算等电点5.23左右，比glycine低，胶缓冲液pH8.45，压缩胶时带的负电荷较多，泳动的较快，小分子多肽之所以难于分离就在于普通的电泳很难将其压缩成一条带，因为glycine跑的慢，而小肽跑的几乎和SDS一般快，所以不能将它们压缩在较窄的区域，分离胶即便孔径达到要求了也不能将之很好的分离，因为它们不是同一起跑线跑的，呵呵，最常见的就是小的分子最后都集中在你溴酚蓝的后面。Tricine就能满足这样的要求，他能将小分子压缩在Cl离子和Tricine构成的迁移区域中，但大分子不能很好的压缩，所以会牺牲一部分大分子。另外，Tricine的离子强度较高，导电性增大，移动区域的电流较高，反相离子的泳动加快，会减缓蛋白的泳动，特别是小分子的泳动速度大大减缓从而保证被压缩在迁移区域内。
不知道我讲的是否清楚，再给你一篇文献：
Nature protocol：Tricine-SDS-PAGE
不当之处敬请指正！
顶部
join[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72960
精华 0
积分 627
帖子 873
信誉分 100
可用分 5266
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
9

发表于 2014-2-20 21:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 jingling845 于 2014-2-20 21:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


看你的图好像是扩散了，你的电流是多少？
给你讲下详细的原理吧：
先介绍glycine的，电泳压缩是将蛋白压缩在迁移区域中，也就前导离子和后随离子之间，glycine就是后随离子，压缩胶的pH是6.8，glycine的等电点是5.97，此时带的负电荷 ...

收益很大，非常感谢！那岂不是进入分离胶以后，蛋白也是在迁移区内，这样怎么能够分离呢？我跑的时候25mA跑不动的，所以就调大了些
你有没有这篇文献啊？Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa
顶部
jingling845[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103462
精华 0
积分 330
帖子 380
信誉分 100
可用分 2671
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
10

发表于 2014-2-20 21:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我以前也一直找这篇文章，可是我们这sciencedirect数据库停订了一直也没法下，你如果能找到发给我一份可以吗？
分离胶的分离主要游靠电荷效应和分子筛效应，进入分离胶根据蛋白电荷的不同迁移率不同，表面携带电荷多迁移快；分离胶的孔径小，蛋白根据分子的大小受到的阻力不同，小的阻力小迁移快，这两种效应作用下，蛋白得到分离，glycine胶在分离胶时后随例子加速迁移超越蛋白紧跟在Cl后，这样就没有了浓缩胶时的一高一低两个电压梯度了，在一种固定的电压梯度下迁移，Tricine胶还是保持两种电压梯度！这样对于小分子一直存在压缩作用，直至阻力增大将其分离开来！
顶部
 26  1/3 123››