小中大【求助】beta-actin条带清楚，却没有目的条带
请问beta-actin有条带，却没有目的条带是哪些方面所致？
我的实验步骤如下：
1.提取组织总蛋白的裂解液如下：
单去污剂裂解液（50mmol/L Tris•HCl pH8.0，150mmol/L NaCl，1％TritonX－100，100ug/ml PMSF）：
1mol/L Tris•HCl（pH8.0） 2.5ml
NaCl 0.438g
TritonX－100 0.5ml
蒸馏水至 50ml
混匀后， 4℃保存。使用时，加入PMSF至终浓度为100ug/ml（0.87ml裂解液加入1.74mg/ml PMSF50μl）。
2.40％Acr/Bic,积层胶（60v）是5％，分离胶（90v）是12％.分子量是53，35，17kDa
3.转膜(250mA恒流)
分子量是57:1h和2h都做过
分子量是17：转膜50分钟
4.一抗37度两小时，二抗37度一小时，都是TBST洗三次，各5－10分钟
（注：师兄师姐用过的抗体，时间最少一年）
5.显色后，分子量57kDa,35kDa，17kDa都没条带（一点迹象都没有）。只有beta-actin有条带。
什么原因呢？
1.样品提取？样品中有内参，是不是一定就有目的蛋白呢？
2.还是抗体？二抗应该没问题吧？
急盼！
