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标题:【求助】做WB转膜时，应该恒压，还是恒流？

wawa[使用道具]
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发表于 2014-2-22 22:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】做WB转膜时，应该恒压，还是恒流？


如题，我用的是北京六一的转膜仪DYCP-40C，设定一个固定的电流值，可电压一直升，后来被迫，将电流调低，所以在这个过程中既没有做到恒压，也没做到恒流，我很困惑这个恒压与恒流要怎么选择呢？ 望高手指点一二
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了了[使用道具]
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发表于 2014-2-22 22:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

建议恒流,理由如下:
1.转膜中热量产生很多,导致缓冲液甲醇的挥发消耗,缓冲液成分变化,如果恒压会导致电流不断改变,转膜过程不平稳.
2.调节到恒流后,电压会变化,但是缓冲液中带电粒子运动稳定,有利于转出高质量的膜.
3.一般小分子蛋白(<50KD)可以300mA 1.5小时,大分子蛋白300mA 2.5h ,效果不错.
试试就知道了Smile
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quiqui008[使用道具]
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发表于 2014-2-22 22:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也遇到这种问题，有人说恒压好，有人说恒流好，看了参考书说横流的也有恒压的也有。上次做了恒压的，效果好像还可以，不过是第一次做，也不知道什么是好什么是不好。我上次用半干，恒压20V。转了90min。
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mod=8048[使用道具]
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发表于 2014-2-22 22:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般来说还是衡流好。
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vcve[使用道具]
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发表于 2014-2-22 22:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我一直采用横流转膜
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发表于 2014-2-22 22:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果你采用的是半干法转膜，最好用恒流。
正常情况下，转膜的过程中电压是逐渐升高的。
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shanzhapia696[使用道具]
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发表于 2014-2-22 22:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问半干法恒流转膜的话，一般用多大的电流 多长时间啊？
谢谢大家！
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HP007[使用道具]
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发表于 2014-2-22 22:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

恒流,楼上说的很有道理
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vtongli[使用道具]
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发表于 2014-2-22 22:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 shanzhapia696 于 2014-2-22 22:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

请问半干法恒流转膜的话，一般用多大的电流 多长时间啊？
谢谢大家！

半干法恒流转膜所用的电流和时间是要根据你的目的蛋白的分子量大小来确定的。
通常来讲，电流从30-120mA不等，时间从0.5-3h不等，目的蛋白的分子量越小，所需的电流和时间也都越少。具体情况你可以使用预染marker作为指示，根据预染marker转移过去的条带判断你所需要的分子量蛋白是否转移过去，同时也可以判断你跑电泳时是否跑过头。
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hyuu[使用道具]
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发表于 2014-2-22 22:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
分子量在30-40kd的蛋白，半干转时你们通常是用多大电流多长时间呢？
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