【求助】如何使用聚乙二醇浓缩蛋白质

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标题:【求助】如何使用聚乙二醇浓缩蛋白质

nikun230[使用道具]
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发表于 2014-2-27 16:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

今天没法用站内搜索
只能发这贴了
小弟以前都用硫酸铵沉淀蛋白
现在打算改用聚乙二醇
请各位介绍下用聚乙二醇浓缩蛋白质的方法
是将聚乙二醇粉末涂抹在透析袋外部好
还是直接往蛋白溶液中加入聚乙二醇
最好大家给我个具体操作过程吧~~~

mamamiya[使用道具]
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发表于 2014-2-27 16:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

当然是将聚乙二醇一般是PEG20000撒在透析带的烧杯里，要盖住一些
涂在外部也太少了吧
那才能吸多少
加在溶液里怎么分啊，还会直接作用于某些蛋白质

remenb[使用道具]
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发表于 2014-2-27 16:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋（无透析袋可用玻璃纸代替），结扎，把高分子（视使用的透析袋孔径而定，常用0.45um）聚合物如聚乙二醇（6 000－12 000碳蜡）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸水剂配成30％－40％浓度的溶液，将装有蛋白液的透析袋放入即可。吸水剂用过后，可放入温箱中烘干或自然干燥后，仍可再用。

yonger[使用道具]
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发表于 2014-2-27 16:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你用过硫酸铵沉淀蛋白质吗？能给我一份详细的过程吗？谢谢！

tuuu2[使用道具]
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发表于 2014-2-27 16:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我这里有PEG1000-20000的分子量的，现货供应，需要的话联络我wuyingwuzong261725@126.com，以前我们是做抗体的，检测浓度太低的时候，就用PEG浓度，就是拿托盘放上透析袋装好的样品溶液，散上PEG，等这就可以了。

bongte[使用道具]
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发表于 2014-2-27 16:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

玻璃纸也可以代替透析袋啊，可是它的截留分子量是多少呢？还有，如果用PEG6000，倘若用的透析袋截留分子量高，如果为6000以上，是不是PEG也会融入到透析袋内啊

plaa[使用道具]
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发表于 2014-2-27 16:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 bongte 于 2014-2-27 16:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

玻璃纸也可以代替透析袋啊，可是它的截留分子量是多少呢？还有，如果用PEG6000，倘若用的透析袋截留分子量高，如果为6000以上，是不是PEG也会融入到透析袋内啊 ...

用PEG进行浓缩，PEG肯定会渗入到透析袋内的，PEG是长链分子，而透析袋截留分子量是针对球形分子来讲的，因此，即便PEG的分子量大于透析袋的截留分子量，它仍然会进入透析袋内。
用PEG浓缩后样品，最好再对缓冲透析，除去混入的PEG。

yes4[使用道具]
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发表于 2014-2-27 16:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

为什么改为ＰＥＧ呢？　饱和硫铵不好吗？

caihong[使用道具]
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发表于 2014-2-27 16:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

要浓缩超滤岂不更好？而且也不需要除盐

qhyu[使用道具]
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发表于 2014-2-27 16:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

超滤浓缩有时候会吸附很多目的蛋白，造成蛋白的大量损失；而饱和硫酸铵有时也会形成不可逆的变性，所以还是需要按照自己的蛋白摸索不同的浓缩方法。